Разлики и характеристики на флуоресцентен микроскоп и обикновен оптичен микроскоп
Флуоресцентният микроскоп и обикновеният оптичен микроскоп са различни, не е чрез осветяване на обикновен източник на светлина, за да наблюдавате образеца, а използването на определена дължина на вълната на светлината (обикновено ултравиолетова, синьо-виолетова светлина) възбуждане на флуоресцентен материал в образеца под микроскоп, така че флуоресценцията на светлинния източник на флуоресцентен микроскоп да не играе пряка светлина, а като вид възбуждане на флуоресцентен материал в образеца на енергийния източник. Причината, поради която можем да наблюдаваме образеца, не се дължи на осветяването на източника на светлина, а на феномена на флуоресценция, представен от флуоресцентния материал в образеца след абсорбиране на светлинната енергия на възбуждане. Може да се види, че характеристиките на флуоресцентния микроскоп, главно неговият светлинен източник, могат да осигурят голям брой специфични дължини на вълната на възбуждащата светлина, така че флуоресцентният материал в изследваната проба да може да получи необходимия интензитет на възбуждащата светлина. В същото време флуоресцентният микроскоп трябва да има съответна филтърна система. Флуоресцентният микроскоп е основният инструмент за флуоресцентна хистохимия. Състои се от източник на светлина със свръхвисоко налягане, филтърна система (включително филтърна плоча за възбуждане и потискане), оптична система и фотографска система и други основни компоненти, е използването на определена дължина на вълната на светлината за стимулиране на образеца да излъчва флуоресценция.
1. начинът на възбуждане на флуоресценцията: според обхвата на дължината на вълната на светлината се разделя на метод на UV възбуждане (използвайки ултравиолетова светлина) и метод на BV възбуждане (използвайки синя виолетова светлина) два вида метод на UV възбуждане са по-къси от 400nm близо до ултравиолетова светлина за възбуда. При този метод няма видима възбуждаща светлина, така че наблюдаваната флуоресценция показва присъщата флуоресценция на багрилото и е лесно да се разграничи специфичната флуоресценция върху образеца от собствената флуоресценция на фоновата тъкан.
2. BV метод на възбуждане: Методът е съсредоточен върху 404nm, 434nm от ултравиолетова до синя светлина за възбуждане. Този метод използва синя светлина за облъчване на образеца, така че прекъсващият филтър на системата за наблюдение на флуоресценцията трябва да използва филтър, който може напълно да блокира синята светлина и да пропуска адекватно желаната зелена и жълта флуоресценция. Флуоресцентни пигменти за метода на флуоресцентни антитела. Тъй като дължината на вълната на максималната абсорбция на възбуждащата светлина и дължината на вълната на максималната емисия на флуоресценцията са близки една до друга, филтрите, използвани в метода на BV възбуждане, трябва да бъдат филтри с рязко прекъсване. Този метод използва синя светлина като възбуждаща светлина, така че ефективността на абсорбция на флуорохрома е по-висока и може да се получи по-ярко изображение. Недостатъкът е, че флуоресценцията под 500 nm не може да се види, а над 500 nm цялото изображение изглежда жълто. При метода с флуоресцентни антитела по-голямата част от специфичността се оценява по уникалния цвят на флуорохрома, така че недостатъците на метода за възбуждане на BV, описан по-горе, са склонни да бъдат изключително влиятелни, когато се обсъжда фината специфичност.
