Какви са специалните структурни компоненти на флуоресцентния микроскоп?
Цветният филтърен блок е важна част от флуоресцентния микроскоп и неговите основни компоненти се състоят от първи бариерен филтър за възбуждаща светлина, втори бариерен филтър за емисионна светлина и огледало за разделяне на лъча. Моделите на цветните филтри и имената на различните производители често не съвпадат.
1. Филтър за възбуждаща светлина и филтър за емисионна светлина: Въз основа на характеристиките на източника на светлина и флуоресцентния пигмент, следните три вида съвпадение обикновено се избират, за да осигурят възбуждаща светлина в рамките на определен диапазон на дължина на вълната и да позволят на флуоресценцията, възбудена от пробата, да премине през и да достигне окуляра за изображения.
UV възбуждане: Филтърът за възбуждаща светлина може да позволи преминаването на UV светлина и да блокира преминаването на видима светлина над 400nm. Съответният емисионен светлинен филтър позволява преминаването на синя светлина и светлината в зрителното поле изглежда синя, например когато се прилага при оцветяване с DAPI.
Възбуждане на синя светлина: Филтърът за възбуждаща светлина може да позволи на синята светлина да премине и да блокира светлината от други дължини на вълната. Съответният емисионен светлинен филтър позволява преминаването на зелена светлина, като GFP маркери за оцветяване.
Възбуждане на зелена светлина: Филтърът за възбуждаща светлина позволява преминаването на зелена светлина и блокира светлината от други дължини на вълната. Съответният емисионен светлинен филтър обикновено позволява преминаването на червена светлина, като оцветяване с родамин.
2. Полупрозрачен и полуотражателен цветен филтър: Неговата функция е напълно да блокира преминаването на възбуждащата светлина и да я отразява; И излъчват светлина в рамките на съответния диапазон на дължина на вълната. Моделът му съответства на филтъра за възбуждаща светлина и филтъра за емисионна светлина.
(2) Обектив и окуляр
Могат да се прилагат различни обективни лещи, но най-добре е да изберете лещи с добавен мащаб и намаляване на хроматичната аберация, тъй като тяхната собствена флуоресценция е изключително ниска и техните показатели за предаване на светлина (диапазон на дължина на вълната) са подходящи за флуоресценция. Поради факта, че флуоресцентната яркост на изображение в полето на микроскопа е право пропорционална на квадрата на съотношението на апертурата на лещата на обектива и обратно пропорционална на неговото увеличение, за да се подобри яркостта на флуоресцентните изображения, трябва да се използва леща на обектив с по-голямо съотношение на апертурата. Особено за проби с недостатъчна флуоресценция трябва да се използва обектив с голямо съотношение на апертурата и висока пропускливост на светлина, придружен от окуляр с възможно най-ниското увеличение.
(3) Други оптични устройства
Отражателният слой на огледалото обикновено е покрит с алуминий, тъй като алуминият абсорбира по-малко ултравиолетова и видима светлина в синьо-лилавата област, отразявайки над 90% (докато среброто има отразяваща способност само 70%). Обикновено се използват плоски огледала. Фокусиращата леща, специално проектирана и произведена за флуоресцентни микроскопи, е направена от кварцово стъкло или друго стъкло, което пропуска ултравиолетова светлина. Устройството за падаща светлина, освен че има функцията на пропускащ източник на светлина, е по-подходящо за директно наблюдение на непрозрачни и полупрозрачни образци, като дебели плочи, филтърни мембрани, бактериални колонии, тъканни култури и други проби. През последните години бяха разработени много нови видове флуоресцентни микроскопи, използващи устройство с падаща светлина, известно като флуоресцентен микроскоп с падаща светлина.
(4) Източник на светлина
Понастоящем като източници на светлина обикновено се използват живачни лампи с високо{0}}налягане от 50 или 100 W. По време на работа възниква разряд между два електрода, което кара живака да се изпари и налягането вътре в сферата бързо да се увеличи (този процес обикновено отнема около 5-15 минути). По време на този процес се излъчват светлинни кванти, а дължината на вълната на освободената светлина е достатъчна, за да възбуди различни флуоресцентни вещества. Поради това се използва широко във флуоресцентни микроскопи.
Срокът на експлоатация на живачните лампи е сравнително кратък, обикновено 200 часа. В отговор на това ограничение на експлоатационния живот през последните години широко се използва нов тип флуоресцентен източник на светлина X-Cite със супер дълъг живот на крушката от 2000 часа и гъвкава употреба - не се изисква предварително загряване, готов за употреба.
