Изправен биофлуоресцентен микроскоп
Принципът на флуоресцентната микроскопия е да се използва високоефективен източник на светлина на светлината (като живачна лампа с ултра високо налягане), за да се излъчва известна дължина на вълната на светлината (като ултравиолетова светлина 3650 λ или лилава синя светлина 4200 λ) чрез цветна филтърна система като изпускане на светлината, която извлича флуоресцентните вещества в образеца, за да излъчва различни цветове на флуоресценция. След това се филтрира чрез блокиращ (или потискащ) филтър зад обективния обектив и се наблюдава чрез лупата на окуляра.
Блокиращият филтър има две функции: Първо, той абсорбира и блокира светлината на възбуждане от влизането в окуляра, за да не се намесва в флуоресценция и да повреди очите; Второто е да изберете и позволите специфична флуоресценция да премине, показвайки специфичен флуоресцентен цвят.
Флуоресцентните микроскопи могат да бъдат разделени на два вида въз основа на принципа на светлинния път:
1. Трансмисионна флуоресцентна микроскоп
По -старите флуоресцентни микроскопи използват прожектор, за да възбудят флуоресценцията, като преминават източник на възбуждаща светлина през материала на образеца. Предимството му е силна флуоресценция при ниско увеличение, но недостатъкът му е, че флуоресценцията му намалява с увеличаване на увеличението. Така че е подходящ само за наблюдение на по -големи материали от образци.
2. Падащ светлинен флуоресцентен микроскоп
Светлината за възбуждане пада от обективната леща върху повърхността на образеца, като използва същата обективна леща като кондензатора за осветяване и обективния обектив за събиране на флуоресценция.
Към оптичния път трябва да се добави двоен цветен лъч (дихроично огледало), който образува 45 градусов ъгъл с оптичната ос. Светлината за възбуждане се отразява в обективния обектив и се фокусира върху пробата. Флуоресценцията, генерирана от пробата, както и светлината на възбуждане, отразена от повърхността на обективния леща и покривно стъкло, въведете едновременно обективната леща и се върнете към двойния цветен сплитер, за да разделите светлината на възбуждане и флуоресценцията. След това остатъчната светлина за възбуждане се блокира от абсорбцията на филтъра. Ако се използват различни комбинации от филтри за възбуждане, сепаратори с двоен цветен лъч и блокиращи филтри, те могат да отговорят на нуждите на различни флуоресцентни реакционни продукти.
Предимствата на този флуоресцентен микроскоп са равномерно осветление на полето, ясно изображение и по -силна флуоресценция с по -голямо увеличение.
