Разликата между лазерния конфокален микроскоп и традиционния оптичен микроскоп
Лазерната сканираща конфокална флуоресцентна микроскопия е относително усъвършенстван инструмент за анализ на молекулярна и клетъчна биология, който използва компютърна, лазерна и технология за обработка на изображения за получаване на триизмерни данни от биологични проби. Използва се главно за наблюдение на структурата на живите клетки и биологичните промени на специфични молекули и йони, количествен анализ и количествено определяне в реално време.
Принципът на лазерната конфокална микроскопия: използвайте отвора за осветяване, поставен зад източника на светлина, и отвора за откриване, поставен пред детектора, за да реализирате точково осветяване и откриване на точки. Светлината, излъчвана от източника на светлина през отвора за осветяване, се фокусира върху точка във фокалната равнина на пробата и излъчената флуоресценция от тази точка се изобразява върху отвора за откриване и всяка излъчена светлина извън тази точка се блокира от откриването дупка. Точковият отвор за осветяване и откриващият отвор са свързани с облъчената точка или засечената точка, така че засечената точка е конфокалната точка, а равнината, в която е разположена засечената точка, е конфокалната равнина.
Компютърът показва откритите точки на екрана на компютъра под формата на изображения. За да генерира пълно изображение, системата за сканиране в оптичния път сканира във фокалната равнина на пробата, за да генерира пълно конфокално изображение. Докато платформата се движи нагоре и надолу по оста Z, нов слой от пробата се премества към конфокалната равнина и новият слой на пробата се изобразява на монитора. С непрекъснатото движение на оста Z могат да се получат непрекъснати изображения на различни слоеве на пробата. Светло изрязано изображение.
Разликата между традиционните светлинни микроскопи
Традиционните флуоресцентни микроскопи имат непреодолим недостатък: флуоресцентните структури извън фокалната равнина са замъглени и замъглени. Причината е, че повечето биологични екземпляри имат припокриващи се структури. Ако флуоресцентно белязаните структури са разпределени на различни нива и се припокриват, разпръснатата флуоресценция отгоре или под фокалната равнина също се приема от лещата на обектива и разделителната способност на флуоресцентния микроскоп ще бъде значително подобрена. намалявам.
Въз основа на традиционните оптични микроскопи, лазерно сканиращите конфокални микроскопи използват лазерна светлина като източник на светлина, възприемат принципа и устройството за конюгирано фокусиране и използват компютри за извършване на цифрова обработка на изображения, наблюдение, анализ и изход на наблюдаваните обекти. Пробата може да бъде томографски сканирана и изобразена за недеструктивно наблюдение и анализ на триизмерната пространствена структура на клетките. В същото време, използвайки сонди за имунофлуоресцентно маркиране и йонно флуоресцентно маркиране, тази технология може не само да наблюдава фиксирани клетки и тъканни срезове, но и да извършва динамично наблюдение в реално време и откриване на структурата, молекулите, йоните и жизнените дейности на живите клетки, на субклетъчно ниво Наблюдаването на физиологични сигнали като Ca2 plus, pH стойност, мембранен потенциал и промени в клетъчната морфология, се превърна в ново поколение мощни изследователски инструменти в областта на морфологията, молекулярната клетъчна биология, неврологията, фармакологията и генетиката.
