Силни страни и ограничения на многофотонните лазерни сканиращи микроскопи
Предимствата са както следва:
1. Възбудено от червена или инфрачервена светлина, разсейването на светлината е малко (разсейването на малките частици е обратно пропорционално на четвъртата степен на дължината на вълната).
2. Няма нужда от дупки, способни да събират повече разпръснати фотони от напречното-сечение на изображението.
3. Пиндупките не могат да различат разпръснатите фотони, излъчвани от разфокусирани или фокални зони, а мултифотоните имат по-добро съотношение сигнал-към-шум при дълбоки изображения.
4. Ултравиолетовата или видимата светлина, използвана за възбуждане на единичен фотон, лесно се абсорбира и отслабва от пробата, преди лъчът да достигне фокалната равнина, което затруднява възбуждането на дълбоки слоеве.
5. По отношение на наблюдението с биологична микроскопия, първото съображение е да не се уврежда активното състояние на самия организъм и да се поддържа циркулацията на водата, концентрацията на йони, кислород и хранителни вещества. В областта на наблюдението на светлината както топлинната, така и фотонната енергия трябва да останат в рамките на дозата на облъчване и светлинната енергия, които не увреждат клетките.
6. Многофотонната микроскопия също има много предимства. По отношение на три{2}}измерна разделителна способност, проникване в дълбочина, ефективност на разсейване, фонова светлина, съотношение-към-шум, контрол и т.н., лазерните микроскопи имат несравними или превъзходни характеристики, които предишните лазерни микроскопи не притежаваха.
Многофотонният конфокален лазерен сканиращ микроскоп е разширен до различни изследователски и приложни области. Той може да извършва три{0}}измерно не-деструктивно наблюдение върху проби в тяхното естествено състояние и да подобрява разделителната способност и съотношението-към-шум на системата Чрез използване на промените в свойствата на материала след многофотонно възбуждане, три-запаметяване на данни за височината и може да се постигне и три{5}}измерна микрофабрикация във всяка посока, която има висока приложна стойност. Може да се смята, че с по-нататъшното развитие на механични, материални и лазерни технологии, свързани с многофотонната конфокална микроскопия, многофотонната конфокална лазерна сканираща микроскопия ще има по-голямо развитие и по-широки приложения
Недостатъците са както следва:
1. Само за флуоресцентни изображения.
2. Ако пробата включва хромофори, които могат да абсорбират възбуждаща светлина, като например пигменти, пробата може да бъде подложена на термично увреждане.
3. Разделителната способност е леко намалена, въпреки че може да бъде подобрена чрез едновременно използване на конфокални малки дупки, ще има загуба на сигнал.
4. Поради ограниченията на скъпите свръхбързи лазери, цената на многофотонните сканиращи микроскопи е относително висока.
