Изисквания за производство на флуоресцентни микроскопски образци
（1） Стъклен предмет
Дебелината на слайда трябва да бъде между 0,8 и 1,2 мм. Ако предметното стъкло е твърде дебело, от една страна, то абсорбира повече светлина, а от друга страна, не може да доведе до събиране на възбуждаща светлина върху образеца. Стъклото трябва да е гладко, с еднаква дебелина и без видима спонтанна флуоресценция. Понякога са необходими предметни стъкла от кварцово стъкло.
（2） Покривно стъкло
Дебелината на покривното стъкло е около 0,17 mm, което е гладко и чисто. За да се подобри възбуждането, може да се използва и интерферентно покривно стъкло. Това е специално проектирано покривно стъкло с няколко слоя вещества (като магнезиев флуорид), които имат различни смущаващи ефекти върху различните дължини на вълната на светлината. Той може да позволи на флуоресценцията да премине гладко, докато възбуждането на отражение може да възбуди образеца.
（3） Образец
Тъканните срезове или други проби не трябва да са твърде дебели, тъй като възбуждащата светлина се изразходва най-вече в долната част на пробата, докато горната част, пряко наблюдавана от лещата на обектива, не се възбужда напълно. В допълнение, припокриването на клетките или маскирането на примеси може да повлияе на преценката.
（4） Уплътняващ агент
Глицеринът обикновено се използва като монтиращ агент и трябва да е без спонтанна флуоресценция, безцветен и прозрачен. Яркостта на флуоресценцията е по-ярка при pH 8,5~9,5 и не е лесно да избледнее бързо. Следователно, равна смес от глицерол и 0.5mol/l карбонатен буфер при pH 9.0-9.5 обикновено се използва като запечатващ агент.
（5） Масло за огледала
При наблюдение на проби с помощта на флуоресцентен микроскоп с тъмно поле и маслен микроскоп е необходимо да се използва масло за лещи. Най-добре е да използвате специално произведено нефлуоресцентно масло за лещи, което също може да бъде заменено с глицерол, както е споменато по-горе. Може да се използва и течен парафин, но индексът на пречупване е нисък и има леко влияние върху качеството на изображението.
Предпазни мерки при използване на флуоресцентен микроскоп
(1) Спазвайте стриктно изискванията на фабричното ръководство за флуоресцентния микроскоп и не променяйте произволно програмата.
(2) Проверката трябва да се извършва в тъмна стая. След като влезете в тъмната стая, свържете захранването и запалете живачната лампа с ултрависоко налягане за 5 до 15 минути. След като източникът на светлина излъчва силна светлина и се стабилизира, очите се адаптират напълно към тъмната стая, преди да започнат да наблюдават образеца.
(3) За да предотвратите UV увреждане на очите, трябва да носите защитни очила, когато регулирате източника на светлина.
(4) Времето за проверка трябва да бъде 1-2 часа всеки път. Ако надвишава 90 минути, светлинният интензитет на живачната лампа със свръхвисоко налягане постепенно намалява и флуоресценцията отслабва; След излагане на ултравиолетово лъчение за 3-5 минути, флуоресценцията на образеца също значително намалява; Така че не трябва да надвишава най-много 2-3 часа.
(5) Животът на светлинния източник на флуоресцентен микроскоп е ограничен и образецът трябва да се проверява централно, за да се спести време и да се защити светлинният източник. Когато времето е горещо, трябва да се добави електрически вентилатор за разсейване на топлината и охлаждане. Когато сменяте нова електрическа крушка, времето за използване трябва да се запише от самото начало. Когато лампата е изключена и иска да се използва отново, тя трябва да изчака крушката да се охлади напълно, преди да бъде запалена. Избягвайте да запалвате светлинния източник многократно.
(6) Наблюдавайте пробата веднага след оцветяването, тъй като флуоресценцията постепенно намалява с времето. Ако пробата се съхранява в полиетиленов пластмасов плик при 4 градуса, това може да забави времето за затихване на флуоресценцията и да предотврати изпаряването на монтиращия агент.
(7) Стандартът за преценка за яркостта на флуоресценцията обикновено е разделен на четири нива, а именно „едно“ – липса или видима слаба флуоресценция. плюс - Може да се види само ясно видима флуоресценция. плюс плюс - видим с ярка флуоресценция. „плюс плюс плюс“ – Видима и ослепителна флуоресценция.
