Плюсове и минуси на многофотонната лазерна сканираща микроскопия
Многофотонната лазерна сканираща микроскопия е експериментален метод, базиран на технологията на лазерен сканиращ микроскоп, която предоставя повече **оптични възможности за разделяне при 3D наблюдение. Методът за многофотонно флуоресцентно възбуждане използва дълги дължини на вълните на червена или близка до инфрачервена светлина за получаване на флуоресцентни изображения с висока разделителна способност на проби с минимално убиване на активни проби, което го прави подходящ за изобразяване на живи клетки, особено дебели живи тъкани като мозъчни резени, ембриони, цели органи и дори цели организми.
Предимствата са както следва:
1, използването на червена светлина или инфрачервена светлина възбуждане, разсейването на светлината е малко(разпръскването намалъкчастици и дължината на вълната на четвъртата степен на обратното отношение).
2, не изисква дупка, може да събира повече разпръснати фотони от напречното сечение на изображението.
3, дупката не може да направи разлика между разпръснатите фотони, излъчвани от зоната извън фокуса или фокусната област, съотношението сигнал/шум на многофотоните в дълбокото изображение е добро.
4, еднофотонно възбуждане на ултравиолетова или видима светлина, използвана в лъча, за да достигне фокалната равнина, преди пробата да бъде лесно абсорбирана и отслабена, не е лесно за дълбоко възбуждане.
5, при наблюдение с биологичен микроскоп, * първото съображение е да не се уврежда активното състояние на самия организъм, да се поддържа вода, концентрация на йони, циркулация на кислород и хранителни вещества. При случаи на наблюдение на светлина както топлинната, така и фотонната енергия трябва да останат в клетката, без да се повреди количеството облъчване, светлинна енергия.
6, многофотонният микроскоп също има много предимства. Като триизмерна разделителна способност, проникване в дълбочина, ефективност на разсейване, фонова светлина, съотношение сигнал/шум, контрол и т.н., има предишни лазерни микроскопи, които нямат или имат несравними извън характеристиките.
Многофотонният конфокален лазерен сканиращ микроскоп е разширен в различни области на изследване и приложение. Той е способен на триизмерно безразрушително наблюдение на проби в тяхното естествено състояние и може да подобри разделителната способност и съотношението сигнал/шум на системата. Използвайки промяната на свойствата на материала след многофотонно възбуждане, също е възможно да се постигне триизмерно съхранение на данни за височината и триизмерно микроизработване във всяка посока, което има висока стойност на приложение. Може да се смята, че с по-нататъшното развитие на машини, материали, лазерна технология и други технологии, свързани с многофотонна конфокална микроскопия, многофотонният конфокален лазерен сканиращ микроскоп ще бъде по-голямо развитие и по-широко приложение.
Недостатъците са както следва:
1, само флуоресцентно изображение.
2, ако пробата включва хромофори, които могат да абсорбират възбуждащата светлина, катопигменти, Образецътможе да бъде термично повреден.
3, разделителната способност е леко намалена, макар чеможе да се подобри чрез едновременното използване на конфокална бленда, ноще има загуба на сигнал.
4. Цената на многофотонната сканираща микроскопия е висока поради ограничението на скъпите свръхбързи лазери.
