Подготовка и наблюдение на биологични проби за електронна микроскопия
Разделителната способност на микроскопа зависи от дължината на вълната на използваната светлина, електронният микроскоп започва да се появява през 1933 г. се дължи на използването на много по-къса дължина на вълната от видимата светлина на електронния лъч като източник на светлина, така че резолюцията му може да постигне значително подобрение от оптичния микроскоп. Различният източник на светлина също определя редица разлики между електронния микроскоп и оптичния микроскоп.
Съгласно разликите в принципа на изобразяване на електронния лъч и ролята на пробата по различните начини, съвременният електронен микроскоп е разработен, за да формира редица типове, в момента * често използвани са трансмисионният електронен микроскоп и сканиращият електронен микроскоп, първото може да бъде в диапазона от 1,000-1,000,000 пъти общото увеличение на обхвата на промените, второто може да бъде в общото увеличение на { {4}},000 пъти общото увеличение на промените между. Този експеримент се фокусира върху подготовката на проби за двата вида микроскопи, трансмисионен електронен микроскоп и сканиращ електронен микроскоп.
Материали
1. Щам Ешерихия коли (Escherichia coli, Escherichia coli) наклон.
2. Разтвори или реагенти Амилацетат, концентрирана сярна киселина, безводен етанол, стерилна вода, 2% натриева фосфорноволфрамова киселина (pH 6.5-8.0) воден разтвор, 0.3% разтвор на поливинилформалдехид (разтворен в трихлорометан), цитохром с, амониев ацетат, плазмид pBR322.
3. Инструменти или други принадлежности Обикновен оптичен микроскоп, медна мрежа, порцеланова фуния, чаша, плоска чиния, стерилна бюрета, стерилни пинсети, ланцет, предметни стъкла, ** броячна плоча, машина за вакуумно нанасяне на покритие, сушилня за критична точка и т.н.
Стъпки на операцията
(I) Подготовка на проби и наблюдение на трансмисионна електронна микроскопия
1. Обработка на метална мрежа
Пробите за оптична микроскопия се поставят върху слайдове за наблюдение. Въпреки това, в трансмисионната електронна микроскопия, тъй като електроните не могат да проникнат през стъкления лист, само мрежест материал може да се използва като носител, обикновено наричан носеща мрежа. Носещата мрежа може да бъде разделена на много различни спецификации поради различните материали и форми, от които * често използваната е 200-400 мрежа (брой дупки) медна мрежа. Медната мрежа трябва да се третира преди употреба, за да се отстрани мръсотията по нея и да се поддържа чиста, в противен случай това ще повлияе на качеството на поддържащия филм и яснотата на снимките на образците. Медната мрежа, използвана в този експеримент, е 400 меша, която може да се третира по следния начин: първо, избелете я с амилацетат за няколко часа, след това я изплакнете с дестилирана вода няколко пъти и след това я избелете в безводен етанол за дехидратация. Ако медната мрежа по горния метод все още не е чиста, може да се използва за разреждане на концентрирана сярна киселина (1:1), потопена за 1 ~ 2 минути, или в 1% разтвор на NaOH, варен за няколко минути, изплакнат няколко пъти с дестилирана вода , поставени в дехидратация с безводен етанол, за да бъдат използвани.
2. Подготовка на поддържащо фолио
При наблюдението на пробата носещата мрежа също трябва да бъде покрита със слой от неструктуриран, равномерен филм, в противен случай малки проби ще изтекат от дупките в носещата мрежа, този слой филм обикновено се нарича поддържащ филм или носещ филм. Поддържащият филм трябва да е прозрачен за електрони и дебелината му обикновено трябва да бъде по-малка от 20 nm; под въздействието на електронния лъч филмът също трябва да има определена степен на механична якост, да поддържа стабилността на структурата и да има добра топлопроводимост; в допълнение, поддържащата мрежа не трябва да има видима структура под електронния микроскоп и няма химическа реакция с носената проба и не пречи на наблюдението на пробата, а нейната дебелина обикновено е около 15 nm. Поддържащото фолио може да бъде направено от пластмасово фолио (напр. памучно фолио, полиетилен формалдехидно фолио и др.), въглеродно фолио или метално фолио (напр. берилиево фолио и т.н.). При рутинни работни условия изискванията могат да бъдат изпълнени с пластмасово фолио, докато подготовката на пластмасовото фолио в памучното залепващо фолио е сравнително лесно, но здравината не е толкова силна, колкото полиетиленовото формалдехидно фолио.
