Подготовка и наблюдение на биологични проби за електронни микроскопи
Разделителната способност на микроскопа зависи от дължината на вълната на използваната светлина. Електронният микроскоп, който се появи през 1933 г., постигна значително по-висока разделителна способност от оптичния микроскоп поради използването на електронни лъчи с дължини на вълните, много по-къси от видимата светлина като източници на светлина. Различните източници на светлина също определят редица разлики между електронните микроскопи и оптичните микроскопи.
Въз основа на разликите в принципите на изобразяване с електронен лъч и начините, по които те въздействат върху проби, съвременните електронни микроскопи са се развили в много видове. В момента най-често използваните са трансмисионни електронни микроскопи и сканиращи електронни микроскопи. Първото има общо увеличение, което може да варира между 1000-10000000 пъти, докато последното има общо увеличение, което може да варира между 20-300000 пъти. Този експеримент представя основно подготовката на два вида микроскопски проби, трансмисионна електронна микроскопия и сканираща електронна микроскопия.
2, Оборудване
1. Щамът Escherichia coli е наклонен.
2. Разтвор или реагент: пентил ацетат, концентрирана сярна киселина, безводен етанол, стерилна вода, 2% воден разтвор на натриев фосфоволфрамат (рН 6,5-8,0), 0,3% разтвор на поливинил формалдехид (разтворен в хлороформ), цитохром с, амониев ацетат, плазмид pBR322.
3. Инструментите или другите инструменти включват обикновени оптични микроскопи, медни мрежи, порцеланови фунии, чаши, петриеви панички, стерилни капкомери, стерилни пинсети, карфици, предметни стъкла, броячни плочи, машини за вакуумно покритие, сушилни за критични точки и др.
3, стъпки на работа
(1) Подготовка и наблюдение на проби за трансмисионна електронна микроскопия
1. Обработка на метална мрежа
Пробата от оптичен микроскоп се поставя върху предметно стъкло за наблюдение. Въпреки това, в предавателно огледало, тъй като електроните не могат да проникнат през стъкления лист, мрежест материал може да се използва само като носител, обикновено наричан носеща мрежа. Носещата мрежа може да бъде разделена на различни спецификации поради различните материали и форми, сред които обикновено се използва медна мрежа с 200-400 меша (брой дупки). Медната мрежа трябва да се третира преди употреба, за да се отстранят всички замърсявания и да се поддържа чиста, в противен случай това ще повлияе на качеството на поддържащия филм и яснотата на снимките на образците. Медната мрежа от 400 меша, използвана в този експеримент, може да се третира по следния метод: първо се накисва и плува с пентилацетат за няколко часа, след това се изплаква няколко пъти с дестилирана вода и накрая се потапя и плава медната мрежа в безводен етанол за дехидратиране. Ако медната мрежа все още не е чиста след горните методи, тя може да се накисне в разредена концентрирана сярна киселина (1:1) за 1-2 минути или да се вари в 1% разтвор на NaOH за няколко минути, да се изплакне няколко пъти с дестилирана вода и след това да се дехидратира в безводен етанол за по-късна употреба.
