PH метър - Определяне и настройка на pH на средата
Всички микроорганизми се влияят от pH на средата, в която живеят. Често наличието на селективни видове стеснява обхвата на pH, в който растат. Понякога киселинността или алкалността на средата може също да действа като фактор за избор на растеж. За биохимичните тестови среди обаче обхватът на рН, в който микроорганизмите проявяват tk активност в субстрата, е по-тесен от обхвата на рН, необходим за растеж: следователно е важно да се коригира рН на средата до очаквания диапазон. Когато лабораторията подготвя средата според състава на средата, pH трябва да се провери и коригира. Трябва да се отбележи, че дори и за готовата синтетична дехидратирана среда, предоставена от производителя (особено за някои основни дехидратирани среди), крайното pH трябва да се измери след приготвяне на експерименталната среда.
Най-точният начин за измерване на pH на дадена среда е с pH метър. Преди употреба той трябва да се калибрира със стандартен буферен разтвор с известно pH (обикновено pH е 4 до 7). Изплакнете електрода на рН метъра с дестилирана вода и го потопете в културалната среда в чашата и след това отчетете рН на културалната среда от скалата на рН метъра. Всеки производител предоставя подробни инструкции за работа за всеки тип pH метър.
При приготвяне на културалната среда PH може лесно да се регулира с помощта на pH метър с механично разбъркване. Хранителната среда трябва да се приготви в контейнер (като голяма бехерова чаша), който може да се разбърква непрекъснато. или обвити с тефлон магнити. pH на агар-съдържащата среда трябва да се коригира след размразяване, което лесно се прави с нагряваща се магнитна бъркалка. Когато регулирате pH, използвайте стандартен буферен разтвор с известно pH, за да калибрирате първо pH метъра. След това поставете композитния електрод и съпротивителния термометър (ако има такъв) в средата, бавно добавете подходящо количество солна киселина и натриев хидроксид от края на чашата далеч от електрода, така че средата да може да достигне и поддържа необходимото pH.
Температурната компенсация на рН метъра трябва да отчита влиянието на температурата върху електродната система: в някои разреждания и среди рН се променя значително с температурата. За течни среди и разреждания pH обикновено може да се регулира и измерва или при 25 градуса, или при температурата, при която се използват.
pH на агарната среда трябва да се коригира след разтваряне и температурата на разтваряне е над 45 градуса: следователно pH на твърдата среда трябва да се определи при температурата на нейната употреба. По това време трябва да се използва композитен електрод с плоска глава и температурната компенсация на pH метъра трябва да се калибрира ръчно. При приготвяне на културалната среда, ако се установи, че pH на културалната среда е различно между състоянието на топене и състоянието на втвърдяване, това означава, че има грешка при регулирането на pH.
По същия начин, когато подготвената среда е термично стерилизирана (напр. автоклавирана), тя също може да претърпи промени в pH. За дехидратираната среда производителят е взел това предвид и обикновено не е необходимо да се регулира рН, но рН на средата, която ще се използва, трябва внимателно да се провери. Ако рН на дехидратираната агарна среда трябва да се коригира по време на повторното разтваряне или приготвяне, най-добре е да се коригира със стерилизирана чрез филтър солна киселина и разтвор на натриев хидроксид след стъпката на стерилизация, за да се избегне образуването на прегряване на средата. Когато се приготвя среда с различни суровини или фармацевтични продукти, pH на средата трябва да се провери след автоклавиране. В допълнение, ако се установи, че рН на средата се променя по същия начин след всеки автоклав, рН може да се коригира по подходящ начин при приготвянето на средата. Въпреки това, все още е необходимо да се определи крайното pH на средата след стерилизация.
