Разбирали ли сте някога основните принципи на фазово-контрастната микроскопия?
Фазово-контрастният микроскоп е изобретен от холандския учен Зернике през 1935 г. за наблюдение на неоцветени проби. За живи клетки и неоцветени биологични проби, поради разликата в индекса на пречупване и дебелината на микроструктурата на всяка част от клетката, когато светлинната вълна преминава през нея, дължината на вълната и амплитудата не се променят, променя се само фазата (разликата в амплитудата ), което е невидимо за човешкото око. наблюдавайте. Микроскопът с фазов контраст променя фазовата разлика и използва дифракция на светлината и явления на интерференция, за да промени фазовата разлика в амплитудна разлика, за да наблюдава живи клетки и неоцветени проби. Разликата между фазовия контрастен микроскоп и обикновения микроскоп е, че се използва пръстеновидна диафрагма вместо променлива диафрагма, използва се обективна леща с фазова пластина вместо обикновена обективна леща и е осигурен телескоп за коаксиалност.
Основни принципи на фазово-контрастната микроскопия:
Използвайки разликата в коефициента на пречупване и дебелината между различните структурни компоненти на обекта, оптичната разлика в пътя, преминаваща през различни части на обекта, се преобразува в разликата в амплитудата (интензитета на светлината) и през събирателната леща с пръстеновидна диафрагма и фазова разлика с фазова плоча Лещата на обектива реализира наблюдателния микроскоп. Използва се главно за наблюдение на живи клетки или неоцветени тъканни срезове, а понякога може да се използва и за наблюдение на оцветени проби, на които липсва контраст.
Оптичната разлика в пътя на видимата светлина, преминаваща през образеца, се променя в амплитудна разлика, като по този начин подобрява контраста между различните структури и прави различните структури ясно видими. Светлината се пречупва след преминаване през образеца, отклонява се от първоначалния оптичен път и се забавя с 1/4λ (дължина на вълната). Ако се увеличи или намали с 1/4λ, оптичната разлика в пътя става 1/2λ и двата лъча се намесват след оста на светлината. Усилване, увеличаване или намаляване на амплитудата, подобряване на контраста.
Микроскопът с фазов контраст има две функции, които другите микроскопи нямат: ① разделя пряката светлина (фонова светлина в зрителното поле) от светлината, дифрактирана от обекта; ② премахва около половината от дължината на вълната от фазата, така че да не може да взаимодейства, което води до промяна в интензитета.
