Функции на всеки филтър във флуоресцентен микроскоп
Най-критичният проблем при флуоресцентната микроскопия е комбинацията от оптични филтри. Както възбуждащият филтър, така и екраниращият филтър трябва да са подходящи за наблюдавания флуоресцентен материал и да съвпадат един с друг. За някои специфични приложения, ако има грешки при избора на филтри, това може да доведе до недоразумения и дори неправилни резултати. Постиженията на технологията за флуоресцентна микроскопия са неделими от високо-качествените филтри и умело съчетаните филтърни групи. Има няколко вида филтри за флуоресцентна микроскопия.
1. Топлинно поглъщащ филтър
Топлинно абсорбиращият филтър е необходим филтър за предотвратяване на топлинното излъчване в спектъра на източника на светлина от увреждане на оптичната система. Ранните усъвършенствани микроскопи са били оборудвани с бутилки с барабанна форма, които могат да задържат дестилирана вода като устройства за поглъщане на топлина. Съвременните широкомащабни- изследователски микроскопи са оборудвани със стъклени топлопоглъщащи филтри в светлинни кутии на светлинни източници или лампови камери, които са прозрачни и леко жълти стъклени листове. Филтрите KG1 (2 mm) и BG38 (4 mm) на Leitz могат да пропускат почти всички спектри на ултравиолетова и видима светлина със скорост на пропускане на светлина до 98%. Той абсорбира само селективно инфрачервеното фототермично лъчение.
2. Възбуждащ филтър
Възбуждащите филтри могат селективно да абсорбират спектрални линии с дълга дължина на вълната и да пропускат само ултравиолетова светлина. Пурпурните, сините и зелените светлинни филтри са филтри за възбуждане. Zeiss, Reichert, серия B на Olympus, серия G, серия BG, серия UG на Shott, серия H, G, BP на Opton, серия BP на Leitz и други оптични филтри са всички филтри за възбуждане.
3. Блокиращ филтър
Блокиращият филтър е филтър, който избирателно абсорбира късовълнови спектрални линии и инфрачервени лъчи, като същевременно позволява да се видят по-дълги вълни. Неговата функция е да даде възможност на наблюдателя да види флуоресценцията, възбудена от обекта, който се проверява, като същевременно предпазва роговицата на наблюдателя от UV увреждане.
4. Цветоразделителен филтър
Филтърът за разделяне на цветове е филтърно огледало, което отразява възбуждащата светлина върху обекта, който се проверява, карайки обекта да излъчва флуоресценция и след това предава флуоресценцията към окуляра. Този тип филтър може да се използва само в кондензатор на падаща светлина, докато флуоресцентният микроскоп с пропусната светлина не изисква разделяне на цветовете.
5. Филтър за смущения
Филтърът за смущения е вид високо{0}}ефективен филтър за възбуждане. Това е филтър, направен чрез подреждане на няколко тънки метални филма между два полирани стъклени листа. Коефициентът на пречупване на всеки тънък метален филм е различен, така че спектралните линии с различни дължини на вълната на източника на осветителна светлина се отразяват многократно върху всеки метален филм. Някои спектрални линии с определени дължини на вълната се премахват от разрушителна интерференция, докато други се подсилват от допълнителна интерференция и се предават. Това води до филтър с тесен спектър на предаване и ширина на половин пик от само 6-20 nm. Пропускливостта може да достигне 60% -70%.
