Принципи на флуоресцентна микроскопия и структурни характеристики
Флуоресцентната микроскопия е използването на висока луминесцентна ефективност на точката, чрез филтриране на цветовата система за излъчване на определена дължина на вълната на светлината (като ултравиолетова 3650 в или виолетово-синя 4200 в) като възбуждаща светлина, възбуждането флуоресцентен материал в образеца излъчва разнообразие от различни цветове флуоресценция и след това се увеличава през обектива и окулярите за наблюдение. По този начин, на фона на силен контраст, дори ако флуоресценцията е много слаба, тя е лесна за идентифициране, висока чувствителност, използвана главно за изследване на клетъчна структура и функция и химичен състав. Основната структура на флуоресцентния микроскоп се състои от обикновен оптичен микроскоп плюс някои аксесоари (като източник на флуоресцентна светлина, възбуждащи филтри, двуцветен разделител на лъча и блокиращи филтри и др.). Флуоресцентен източник на светлина - обикновено се използва живачна лампа с ултрависоко налягане (50-200W), която може да излъчва различни дължини на вълната на светлината, но всеки флуоресцентен материал има най-силна дължина на вълната на възбуждане на флуоресценцията, така че необходимостта от добавяне на филтри за възбуждане (обикновено ултравиолетов, виолетов, син и зелен филтър за възбуждане), така че само определена дължина на вълната на възбуждащата светлина чрез облъчване на образците, докато другата светлина се абсорбира. Затова е необходимо да се добави възбуждащ филтър (обикновено ултравиолетови, виолетови, сини и зелени възбуждащи филтри), така че само определена дължина на вълната на възбуждащата светлина да преминава през образеца, докато другата светлина се абсорбира. Когато всяко вещество се облъчва с възбуждаща светлина, то излъчва видима флуоресценция с по-голяма дължина на вълната от тази на облъчената светлина за много кратко време. Флуоресценцията има специфичност, обикновено по-слаба от възбуждащата светлина, за да може да се наблюдава специфичната флуоресценция, лещата на обектива зад необходимостта от добавяне на блокиране (или потискане) трябва да бъде избрана за използване.
Разлика между флуоресцентен микроскоп и обикновен микроскоп
1. Методът на осветяване обикновено пада, т.е. източникът на светлина се проектира върху пробата през обектива;
2. Източникът на светлина е ултравиолетова светлина, с по-къса дължина на вълната и по-висока разделителна способност от обикновените микроскопи;
3. Има два специални филтъра, единият пред източника на светлина се използва за филтриране на видимата светлина, а този между окуляра и лещата на обектива се използва за филтриране на ултравиолетовата светлина за защита на човешкото око.
Флуоресцентният микроскоп също е вид оптичен микроскоп, основната разлика е, че дължината на вълната на възбуждане на двете е различна. Това определя структурата на флуоресцентния микроскоп и обикновения оптичен микроскоп и използването на различни методи.
Флуоресцентният микроскоп е основният инструмент за имунофлуоресцентна цитохимия. Състои се от източник на светлина, система от филтърни плочи и оптична система и други основни компоненти. Той използва определена дължина на вълната на светлината, за да стимулира образеца да излъчва флуоресценция, която се увеличава чрез системата от лещи на обектива и окуляра, за да се наблюдава флуоресцентното изображение на образеца.
