Принцип на приложение и използване на флуоресцентен микроскоп
(1) Принципът и структурните характеристики на флуоресцентния микроскоп: флуоресцентният микроскоп използва точков източник на светлина с висока светлинна ефективност, за да излъчва светлина с определена дължина на вълната (като ултравиолетова светлина 3650 in или лилаво синя светлина 4200 in) през филтърна система като възбуждаща светлина за възбуждане на образеца. След като флуоресцентното вещество вътре излъчва флуоресценция в различни цветове, то се наблюдава чрез увеличение на лещата на обектива и окуляра. По този начин, при силен контрастен фон, дори ако флуоресценцията е много слаба, той е лесен за идентифициране и има висока чувствителност. Използва се главно за изследване на клетъчна структура и функция и химичен състав. Основната структура на флуоресцентния микроскоп се състои от обикновен оптичен микроскоп плюс някои аксесоари (като източник на флуоресцентна светлина, възбуждащ филтър, двуцветен разделител на лъча и блокиращ филтър и др.). Флуоресцентен източник на светлина - обикновено се използва живачна лампа със свръхвисоко налягане (50-200W), която може да излъчва светлина с различни дължини на вълната, но всяко флуоресцентно вещество има дължина на вълната на възбуждане, която произвежда най-силната флуоресценция, така че филтър за възбуждане (Обикновено, има ултравиолетови, лилави, сини и зелени филтри за възбуждане), които позволяват само на възбуждаща светлина с определена дължина на вълната да премине през и да облъчи образеца, докато абсорбира друга светлина. След като всяко вещество бъде облъчено от възбуждаща светлина, то излъчва видима флуоресценция с по-голяма дължина на вълната от дължината на вълната на облъчване за много кратко време. Флуоресценцията е специфична и обикновено по-слаба от възбуждащата светлина. За да се наблюдава специфична флуоресценция, е необходим блокиращ (или потискащ) филтър зад лещата на обектива. Той има две функции: едната е да абсорбира и блокира навлизането на възбуждащата светлина в окуляра, за да не наруши флуоресценцията и да не повреди очите; другият е да изберете и оставите специфичната флуоресценция да премине, показвайки специфичен флуоресцентен цвят. Двата филтъра трябва да се използват заедно.
Има два вида флуоресцентни микроскопи по отношение на техните оптични пътища:
1. Трансмисионен флуоресцентен микроскоп: Източникът на възбуждаща светлина преминава през материала на пробата през кондензаторна леща, за да възбуди флуоресценцията. Обикновено се използва колектор за тъмно поле, а обикновен колектор може също да се използва за регулиране на огледалото, така че възбуждащата светлина да се пренасочва и заобикаля към образеца. Това е по-стар флуоресцентен микроскоп. Предимството е, че флуоресценцията е силна при ниско увеличение, но недостатъкът е, че флуоресценцията намалява с увеличаването на увеличението. Поради това е по-добре да се наблюдават по-големи материали за проби.
2. Епи-флуоресцентният микроскоп е нов тип флуоресцентен микроскоп, разработен в съвремието. Разликата е, че възбуждащата светлина пада от лещата на обектива към повърхността на образеца, т.е. същата леща на обектива се използва като кондензатор за осветяване и леща на обектива за събиране на флуоресценция. Дихроичен разделител на лъча трябва да се добави в светлинния път, който е на 45 градуса от лекия уран. Възбуждащата светлина се отразява в лещата на обектива и се събира върху пробата. Флуоресценцията, генерирана от пробата, и възбуждащата светлина, отразена от повърхността на лещата на лещата на обектива и повърхността на покривното стъкло, влизат в лещата на обектива едновременно и се връщат към двуцветния разделител на лъча, за да направят възбуждащата светлина отделена от флуоресценцията , остатъчната възбуждаща светлина се абсорбира от блокиращи филтри. Като промяна на комбинация от различен възбуждащ филтър/двуцветен разделител на лъча/блокиращ филтър, той може да отговори на нуждите на различни флуоресцентни реакционни продукти. Предимството на този вид флуоресцентен микроскоп е, че осветяването на зрителното поле е равномерно, изображението е ясно и колкото по-голямо е увеличението, толкова по-силна е флуоресценцията.
(2) Как да използвате флуоресцентния микроскоп.
1. Включете източника на светлина и живачната лампа със свръхвисоко налягане трябва да се загрее за няколко минути, за да достигне най-ярката точка.
2. Трансмисионният флуоресцентен микроскоп трябва да инсталира необходимия филтър за възбуждане между източника на светлина и кондензатора и да инсталира съответния блокиращ филтър зад лещата на обектива. Епи-флуоресцентните микроскопи трябва да вмъкнат необходимия филтър за възбуждане/вложки за разделител на двуцветен лъч/блокиращ филтър в слотовете на пътя на светлината.
3. Наблюдавайте с обектив с ниско увеличение и регулирайте центъра на светлинния източник така, че да се намира в центъра на цялото светлинно петно според устройството за настройка на различните модели флуоресцентни микроскопи.
4. Поставете образеца и наблюдавайте след фокусиране. Трябва да се обърне внимание по време на употреба: не наблюдавайте директно с крайния филтър, за да не причините увреждане на очите; при наблюдение на проби с маслена леща трябва да се използва специална маслена леща без флуоресценция; след като живачната лампа с високо налягане е изключена, тя не може да се включи отново веднага, трябва да се тества. Може да се рестартира след 5 минути, в противен случай ще бъде нестабилен и ще повлияе на живота на живачната лампа.
(3) Наблюдавайте клетките, оцветени с 0.01 процента акридиново оранжево флуоресцентно багрило под флуоресцентния микроскоп на платформата за обучение със синьо-виолетов светлинен филтър. Ядрото и цитоплазмата са възбудени да произведат два различни цвята флуоресценция (тъмнозелено и оранжево-червено).
