Подобряване на предимствата на многофотонната лазерна сканираща микроскопия
Лазерната сканираща многофотонна микроскопия е голямо подобрение в сравнение с оптичната микроскопия. Той може да наблюдава дълбоката структура на живи клетки, фиксирани клетки и тъкани и може да получи ясни и отчетливи многослойни Z-равнинни структури, тоест оптични разрези, от които може да конструира триизмерната твърда структура на образеца. Конфокалната микроскопия използва източник на лазерна светлина, който след разширяване изпълва цялата задна фокална равнина на лещата на обектива и след това преминава през системата от лещи на лещата на обектива, за да се слее в много малка точка на фокалната равнина на образеца. В зависимост от цифровата апертура на лещата на обектива, диаметърът на най-ярката точка на осветяване е около 0.25 ~ 0.8μm, а дълбочината е около 0.5 ~ 1.5μm . Размерът на конфокалното петно зависи от дизайна на микроскопа, дължината на лазерната вълна, характеристиките на лещата на обектива, настройките на състоянието на сканиращия модул и свойствата на образеца. Диапазонът на осветяване и дълбочината на осветяване на полевия микроскоп са големи, докато осветяването на конфокалния микроскоп е концентрирано върху точен фокус върху фокалната равнина. Най-основното предимство на конфокалната микроскопия е, че може да извършва фино оптично нарязване на дебели флуоресцентни проби (които могат да достигнат 50 μm или повече), а дебелината на срезовете е около 0,5 до 1,5 μm. Серийни изображения на оптичен разрез могат да бъдат получени чрез преместване на образеца нагоре и надолу с помощта на усъвършенстван стъпков двигател на Z-ос на микроскоп. Събирането на информация за изображението се контролира в точна равнина, без да се намесва от сигнали, излъчвани от други места на образеца. След премахване на влиянието на фоновата флуоресценция и увеличаване на съотношението сигнал/шум, контрастът и разделителната способност на конфокалните изображения са значително подобрени в сравнение с традиционните флуоресцентни изображения, осветени в полето. В много екземпляри много сложни структурни компоненти са преплетени, за да образуват сложни системи, но след като бъдат събрани достатъчно оптични секции, можем да ги реконструираме в три измерения чрез софтуер. Този експериментален метод е широко използван в биологичните изследвания за изясняване на сложните структурни и функционални връзки между клетките или тъканите.
