Подобряване на предимствата на лазерно сканиращата многофотонна микроскопия
Лазерната сканираща многофотонна микроскопия е голямо подобрение в сравнение с оптичната микроскопия. Той може да наблюдава дълбоката структура на живи клетки, фиксирани клетки и тъкани и може да получи ясни и отчетливи многослойни Z-равнинни структури, тоест оптични разрези, от които може да конструира триизмерната твърда структура на образеца. Конфокалната микроскопия използва източник на лазерна светлина, който след разширяване изпълва цялата задна фокална равнина на лещата на обектива и след това преминава през системата от лещи на лещата на обектива, за да се слее в много малка точка на фокалната равнина на образеца. В зависимост от цифровата апертура на лещата на обектива, диаметърът на най-ярката точка на осветяване е около 0.25 ~ 0.8μm, а дълбочината е около 0.5 ~ 1.5μm . Размерът на конфокалното петно зависи от дизайна на микроскопа, дължината на вълната на лазера, характеристиките на лещата на обектива, настройките на състоянието на сканиращия модул и свойствата на образеца. Полевата микроскопия има голям обхват и дълбочина на осветяване, докато конфокалната микроскопия има фокусирано осветяване, фокусирано върху фокусна точка във фокалната равнина. Най-основното предимство на конфокалната микроскопия е, че може да извършва фини оптични срезове на дебели флуоресцентни проби (които могат да достигнат 50 μm или повече), а дебелината на срезовете е около 0,5 до 1,5 μm. Поредица от изображения на оптичен разрез могат да бъдат получени чрез преместване на образеца нагоре и надолу с помощта на стъпковия двигател на Z-ос на микроскопа. Получаването на информация за изображението се контролира в рамките на равнината и няма да се намесва от сигнали, излъчвани от други места на образеца. След премахване на влиянието на фоновата флуоресценция и увеличаване на съотношението сигнал/шум, контрастът и разделителната способност на конфокалните изображения са значително подобрени в сравнение с традиционните флуоресцентни изображения, осветени в полето. В много екземпляри много сложни структурни компоненти са преплетени, за да образуват сложни системи, но след като бъдат събрани достатъчно оптични секции, можем да ги реконструираме в три измерения чрез софтуер. Този експериментален метод е широко използван в биологичните изследвания за изясняване на сложните структурни и функционални връзки между клетките или тъканите.
