Разлики и предимства и недостатъци между трансмисионна флуоресцентна микроскопия и отразяваща флуоресцентна микроскопия
1. Трансмисионен флуоресцентен микроскоп: Източникът на възбуждаща светлина се предава през материала на пробата през кондензатор за възбуждане на флуоресценция. Често използвани концентратори на тъмно поле или обикновени концентратори могат да се използват за регулиране на рефлектора за преобразуване на възбуждаща светлина и странична светлина върху образеца. Това е сравнително старомоден флуоресцентен микроскоп. Предимството му е силната флуоресценция при ниско увеличение, а недостатъкът му е, че флуоресценцията му отслабва с увеличаване на увеличението. Поради това е по-добре да се наблюдават материали с по-големи проби.
2. Флуоресцентен микроскоп с падащ лъч: Това е нов тип флуоресцентен микроскоп, разработен в съвременните времена. За разлика от предишния, възбуждащата светлина пада от лещата на обектива върху повърхността на образеца, като се използва същата леща на обектива като осветителния кондензатор и лещата на обектива за събиране на флуоресценция. Трябва да се добави двуцветен разделител на лъча към оптичния път, който образува ъгъл от 45 градуса с фотоурана. Възбуждащата светлина се отразява в лещата на обектива и се събира върху пробата. Флуоресценцията, генерирана от пробата, и възбуждащата светлина, отразена от повърхността на лещата на обектива и покривното стъкло, едновременно навлизат в лещата на обектива и се връщат към двуцветния разделител на лъча, разделяйки възбуждащата светлина и флуоресценцията. След това остатъчната възбуждаща светлина се абсорбира от блокиращия филтър. Ако се използват различни комбинации от възбуждащи филтри, двуцветни сепаратори на лъчи и блокиращи филтри, те могат да отговорят на нуждите от различни флуоресцентни реакционни продукти. Предимствата на този флуоресцентен микроскоп са равномерно осветяване на зрителното поле, ясно изображение и по-силна флуоресценция с по-голямо увеличение.
Предимствата и недостатъците на трансмисионната флуоресцентна микроскопия
Източник на светлина: живачна лампа с високо налягане или халогенна лампа.
Огледало с прожектор: Използване на прожектор с тъмно поле за разделяне на възбуждането и флуоресценцията.
Обектив: Може да се използва всякакъв тип обектив.
Образец: Тънките образци са по-подходящи за наблюдение на предаването.
Предимства: ① Поради използването на кондензатор на тъмно поле, възбуждащата светлина не може да навлезе в лещата на обектива, което улеснява формирането на тъмен фон и постигането на добър контраст, и всеки обектив може да се използва за наблюдение. ② Когато използвате обектив с ниско увеличение, той е по-ярък от отразяващ флуоресцентен микроскоп.
Недостатък: Центърът и височината на прожектора трябва да се регулират правилно, в противен случай не може да се получи ярко флуоресцентно изображение. Поради ограничението на фокусното разстояние на прожектора с тъмно поле, дебели стъклени предметни стъкла не могат да се използват. Зоната на осветяване на зрителното поле не трябва да е твърде голяма, в противен случай може да доведе до избледняване на флуоресцентния цвят на флуоресцентния образец. Дебели или непрозрачни проби не са подходящи.
Предимствата и недостатъците на отразяващата флуоресцентна микроскопия
Източник на светлина: живачна лампа с високо налягане или халогенна лампа.
Фокусираща леща: Тъй като лещата на обектива служи като фокусираща леща, няма нужда от фокусираща леща.
Обективна леща: Използваната обективна леща трябва да може да пропуска достатъчно ултравиолетова светлина и сама да не произвежда флуоресценция, без ограничение на цифровата апертура.
Образец: Могат да се наблюдават както дебели, така и непрозрачни образци.
Предимства: ① Тъй като лещата на обектива служи и като прожектор, тя не изисква много настройка. ② Чрез използването на метода на осветяване на Kolar могат да се използват ефектите на апертурата и апертурите на зрителното поле. Числената апертура на лещата на обектива не е ограничена и изображения с висока разделителна способност могат да се получат и при голямо увеличение. Могат да се използват и дебели или непрозрачни образци наблюдавани и могат да се използват и дебели покривни стъкла Други методи за наблюдение също могат да се комбинират с отразена флуоресценция, особено с метод на фазова разлика и метод на диференциална интерференция на предаване Може да се избегне ненужното явление на избледняване на цвета на флуоресценцията.
Недостатък: Когато се използва обектив с наземно увеличение, изображението е сравнително тъмно, така че трябва да се използва обектив с висока числова апертура. Филтърната система трябва ефективно да разделя възбуждащата луминесценция и флуоресценцията.,
