Определяне на микробна популация - метод на директно микроскопско броене!
I. Изисквания за целта
1, За изясняване на принципа на броене на хематокрита.
2, Овладейте метода за микробно броене с помощта на хематокритна плоча.
II. Основни принципи
Методът за директно броене с микроскоп е малко количество суспензия от пробата, която трябва да се тества върху специално предметно стъкло с определена площ и обем (известен също като бактериологичен брояч), директно броене в микроскопа като прост, бърз, интуитивен метод. Понастоящем местните и чуждестранните често използвани бактериологични броячи са: плоча за броене на кръвни клетки, бактериологични броячи на Peteroff-Hauser и бактериологични броячи на Hawksley и т.н., които могат да се използват за дрожди, бактерии, спори на плесени и други суспензии на броене, основният принцип е същото. Последните два типа броячи имат общ обем 0.02 mm3 след поставяне на покривното стъкло, а разстоянието между покривното стъкло и носещия срез е само 0,02 mm, така че по-малки клетки, като напр. бактериите могат да бъдат наблюдавани и преброени с маслен имерсионен обектив. В допълнение към използването на тези броячи, има и метод за оценка на съотношението на площта на намазката към площта на зрителното поле, наблюдавана директно под микроскоп, който обикновено се използва за бактериологично изследване на краве мляко. Предимствата на метода за директно броене с микроскоп са интуитивен, бърз и лесен за работа. Недостатъкът на този метод обаче е, че резултатът обикновено е сбор от мъртви и живи организми. Има някои методи за преодоляване на този недостатък, като комбинацията от микрокамерна култура, оцветена с живи бактерии (за кратко време) и добавянето на инхибитори на цитокинезата, за да се постигне целта за преброяване само на живи организми.
Стъпки на операцията
1, Приготвяне на бактериална суспензия
Използвайте стерилен физиологичен разтвор, за да направите бактериална суспензия от бирена мая с подходяща концентрация.
2, Огледална камера за броене
Преди добавяне на проби, камерата за броене на плочата за броене трябва първо да се провери. Ако има мръсотия, трябва да се почисти и изсуши със сешоар преди броене.
3, добавяне на проби
Чиста и суха плоча за броене на кръвни клетки, покрита с покривно стъкло, и след това използвайте стерилна капилярна бюрета, за да разклатите суспензията от бирена мая от ръба на покривното стъкло, за да капне малка капка, така че бактериалната течност през празнината чрез капилярно проникване в камерата за броене автоматично, като цяло камерата за броене може да се напълни с бактериална течност. При вземане на проби бактериалният разтвор трябва първо да се разклати добре; при добавяне на проби камерата за броене не трябва да има въздушни мехурчета.
4, Микроскопско броене
След като добавите пробата, оставете я да почине за 5 минути, след това поставете плочата за броене на кръвни клетки върху стойката на микроскопа, първо намерете местоположението на камерата за броене с ниско увеличение и след това я сменете на голямо увеличение за броене. Регулирайте интензитета на светлината на микроскопа по подходящ начин, тъй като микроскопът с рефлекторна светлина също трябва да обърне внимание на светлината не трябва да е предубедена на една страна, в противен случай зрителното поле не е лесно за език, ясна решетка на камерата за броене, или вижте само вертикалната линия или вижте само хоризонталната линия. Ако се установи, че бактериалната течност е твърде гъста или твърде рядка преди преброяване, е необходимо да се коригира отново разреждането преди преброяване. Общите изисквания за разреждане на пробата от около 5 до 10 бактерии във всяка клетка са подходящи. За всяка камера за броене организмите в 5 средни отделения (4 ъгъла и едно средно отделение в центъра) се избират за преброяване. Организмите, разположени на линиите на мрежата, обикновено се броят само на горната и дясната линия. В случай на пъпкуване на дрожди, когато пъпкуващото тяло достигне половината от размера на майчината клетка, то се брои като два организма. Преброяване на проба от двете камери за броене в средната стойност за изчисляване на бактериалното съдържание на пробата.
5. Почистване на плочата за хематокрит
След употреба изплакнете плочата за броене на кръвни клетки с вода под чешмата, не използвайте твърди предмети за миене и четкане, изсушете я сами или използвайте сешоар, за да я изсушите след измиване. Огледайте под микроскоп плочата, за да видите дали има остатъчни организми или други утайки във всяко отделение. Ако не е чиста, измиването трябва да се повтори, докато стане чиста.
