Опишете подробно стъпките и методите за избор на флуоресцентни сонди за конфокална микроскопия
При експерименти с конфокални микроскопи някои експериментални индикатори могат да бъдат открити с помощта на автофлуоресценцията на самата проба или на екзогенни вещества, но повечето от веществата, които трябва да бъдат тествани, нямат измерима флуоресценция и трябва да бъдат маркирани с флуоресцентни сонди. Има измерим флуоресцентен сигнал. И така, как да изберем флуоресцентни сонди за конфокална микроскопия?
1. Определете показателите, които ще се проверяват според целта на експеримента
След като се определи индексът на откриване, се определя и обхватът на избор на флуоресцентни сонди. Може да се види, че изборът коя флуоресцентна сонда да се използва в експеримента се определя от целта на експеримента. Например, ако целта на експеримента е да се изследват промените на калциевите йони в кардиомиоцитите при възникване на предсърдно мъждене, може да се определи, че субстанцията, която ще се тества, са калциеви йони в кардиомиоцитите и обхватът на избор на флуоресцентни сонди е ограничен до сонди за калциеви йони, които могат да маркират живи клетки. Игла.
2. Определете обхвата на наличните флуоресцентни сонди
За нови експериментални вещества или индикатори, ако целта на експеримента не е да изследва нови флуоресцентни сонди, можете да изберете да приложите зрели сонди и методи за етикетиране. Типът или гамата от флуоресцентни сонди, които могат да маркират веществото, което ще се тества, може да се определи чрез търсене в авторитетна литература или продуктови каталози на добре известни компании за реагенти у нас и в чужбина.
3. Проучете дали характеристиките на флуоресцентната сонда отговарят на изискванията за подготовка на флуоресцентни проби
Характеристиките на флуоресцентните сонди пряко влияят върху етикетирането на пробите и експерименталните резултати. Следователно, преди да изберете флуоресцентни сонди и да маркирате проби в експеримента, е необходимо да разберете напълно техните флуоресцентни характеристики. Характеристиките на флуоресцентните сонди, които трябва да бъдат изследвани, включват:
1. Реакционни характеристики на светлинни сонди и проби
2. Чувствителност и интензитет на флуоресценция на флуоресцентни сонди
3. Спектрални свойства на проби, маркирани с флуоресцентни сонди
4. Стабилност на флуоресценцията
5. Взаимодействие между множество флуоресценции в пробата
