Методи и стъпки за отстраняване на грешки при фазово контрастна микроскопия
а. Въз основа на регулирането на системата за осветление на Kuhler, използвайте метода на яркото поле, за да фокусирате ясно пробата;
b. Завъртете прожектора към Ph1 и го подравнете с линията на скалата на грамофона. Изберете обектив с фазов контраст 10 x и го заменете с прозрачната проба, която ще наблюдавате;
c. Отстранете един от окулярите, сменете го с центриращ телескоп и фокусирайте върху двата контрастни пръстена в зрителното поле (черния контрастен пръстен на обектива и контрастния пръстен за пропускливост на кондензаторната леща);
d. Двата различни пръстена в зрителното поле не е задължително да съвпадат. Регулирайте двете устройства за регулиране на прожектора (регулиране на лявата и дясната позиция на диференциалните пръстени с регулиращи пръти и фрикционни копчета за регулиране на предните и задните позиции), така че прозрачният пръстен да се движи напред-назад, за да съвпадне с черния пръстен ;
д. След настройката превключете обратно към окуляра за наблюдение и натиснете зеления филтър в оптичния път, за да наблюдавате изображението на фазовата разлика на пробата;
f. При наблюдение с обективи 20 x и 40 x, прожекторът трябва да бъде поставен на позиция Ph2, а при използване на обектив 100 x, прожекторът трябва да бъде поставен на позиция Ph3.
Обхват на приложение: Подходящ за наблюдение на прозрачни, неоцветени или неоцветени проби, като различни клетки, живи тъкани, неоцветени или неоцветени тъканни срезове, водни организми и др.
Основният принцип на фазовия контрастен микроскоп
Когато светлината преминава през относително прозрачен образец, няма значителна промяна в дължината на вълната (цвят) и амплитудата (яркостта) на светлината. Следователно, когато се наблюдават неоцветени образци (като живи клетки) под обикновен оптичен микроскоп, тяхната морфология и вътрешна структура често са трудни за разграничаване. Въпреки това, поради разликите в индекса на пречупване и дебелината на различните части на клетката, ще има разлики в оптичния път на директна и дифрактирана светлина при преминаване през този образец. Тъй като оптичният път се увеличава или намалява, фазата на ускоряващите или изоставащите светлинни вълни ще се променя (което води до фазова разлика). Фазовата разлика на светлината не може да се усети с невъоръжено око, но микроскопът за фазова разлика може да използва специалното си устройство - кръгла бленда и фазова пластина, и да използва явлението интерференция на светлината, за да трансформира фазовата разлика на светлината в амплитудна разлика (разлика в светлината и тъмнината), която може да бъде открита от човешкото око. Това кара първоначално прозрачния обект да показва очевидни светли и тъмни разлики, подобрява контраста и ни позволява ясно да наблюдаваме живи клетки и определени фини структури вътре в клетките, които не могат да се видят или ясно да се видят под обикновени оптични микроскопи и микроскопи с тъмно поле.
Принципът на изобразяване на фазов контрастен микроскоп: Оптичният източник може да премине само през прозрачен пръстен с кръгъл отвор, който след това се фокусира в лъч светлина. Когато този лъч светлина преминава през изпитвания обект, той претърпява различни степени на отклонение (дифракция) поради различните оптични пътища на всяка част. Поради факта, че изображението, образувано от прозрачния пръстен, съвпада с конюгираната повърхност на фазовата плоча и фокалната равнина зад лещата на обектива. Следователно директната светлина, която не се е отклонила, преминава през конюгираната повърхност, докато дифрактирана светлина, която се е отклонила, преминава през компенсиращата повърхност. Поради различните свойства на конюгираната повърхност и компенсационната повърхност на фазовата плоча, те съответно ще генерират определена фазова разлика и намаляване на интензитета на светлината, преминаваща през тези две части. След това двата комплекта светлина ще се сближат през задната леща и ще се движат по една и съща оптична пътека, причинявайки интерференция между директна и дифрактирана светлина, променяйки разликата във фазите в разлика в амплитудата. По този начин, по време на фазово-контрастна микроскопия, фазовата разлика, която не може да се различи от човешкото око, се преобразува в амплитудна разлика (разлика в яркостта), която може да се различи от човешкото око през светлината на безцветно прозрачно тяло.
