Основна структура на конфокалната флуоресцентна микроскопия
(1) Сканиращ модул
Сканиращият модул се състои главно от светлинна лента с дупка (контролираща дебелината на оптичните срезове), спектроскоп (променящ посоката на разпространение на светлината според дължината на вълната), емисионен флуоресцентен колориметър (избиращ светлина в определен диапазон на дължина на вълната за откриване) и детектор (фотоумножителна тръба). Смесената флуоресценция във флуоресцентната проба навлиза в скенера и след като бъде избрана от светлинната лента на отвора за откриване, спектрометъра и колориметъра, тя се разделя на различни монохроматични флуоресценции, които се откриват в различни флуоресцентни канали и образуват съответните конфокални изображения. В същото време няколко паралелни монохроматични флуоресцентни изображения и техните съставни изображения могат да бъдат показани на екрана на компютъра.
(2) Система за флуоресцентна микроскопия
Микроскопът е основният компонент на LSCM, който е свързан с качеството на изображението на системата. Оптичният път на микроскопа може лесно да бъде вмъкнат в безкрайно отдалечена оптична система с оптични опции, без да се засяга качеството на изображението и точността на измерване. Обективът трябва да бъде апохроматичен обектив с плоско поле с голяма цифрова апертура, който е полезен за придобиване на флуоресценция и ясно изображение. Преобразуването на групата лещи на обектива, изборът на група цветни филтри, регулирането на движението на сцената и заключването на паметта на фокалната равнина трябва да се управляват автоматично от компютъра.
Флуоресцентният микроскоп, използван при лазерна сканираща конфокална микроскопия, като цяло е същият като конвенционалния флуоресцентен микроскоп, но има свои собствени характеристики: той трябва да бъде свързан към скенер, така че лазерът да може да влезе в обектива на микроскопа, за да облъчи пробата и да направи флуоресценцията, излъчвана от пробата, достига до детектора; Необходимо е устройство за преобразуване на светлинния път, което преобразува живачните лампи в лазери и интензитетът на светлината на живачната лампа може да се регулира.
(3) Общи лазери
Лазерните източници, използвани в лазерната сканираща конфокална микроскопия, включват единични лазерни и многолазерни системи, а често използваните лазери включват следните три типа:
Полупроводников лазер: 405 nm (близо до ултравиолетовата спектрална линия)
Аргонов йонен лазер: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (синьо-зелена светлина)
He-Ne лазер: 543nm (зелен He-Ne зелен лазер) 633nm (червен He-Ne червен лазер)
UV лазер (UV лазер): 351 nm, 364 nm (UV светлина)
(4) Спомагателно оборудване
Охлаждащи системи с въздушно, водно охлаждане и регулирани захранвания.
Основният принцип на работа на лазерно сканиращия конфокален микроскоп е първо да излъчва определена дължина на вълната възбуждаща светлина от лазера. След усилване светлината преминава през осветената светлинна лента в скенера, за да образува точков източник на светлина. Лещата на обектива се фокусира върху фокалната равнина на пробата и съответните осветени точки върху пробата се възбуждат и излъчват флуоресценция. След преминаване през светлинната лента на отвора за откриване, тя достига до детектора и се изобразява на екрана за наблюдение на компютъра. По този начин се формира пълно конфокално изображение от флуоресцентните изображения на всяка точка от пробата във фокалната равнина, което се нарича светлинен срез.
