Предимства и недостатъци на многофотонната лазерна сканираща микроскопия (MLSM)
Многофотонната лазерна сканираща микроскопия е експериментален метод, базиран на технология за лазерна сканираща микроскопия, която осигурява по-добри възможности за оптично разделяне за триизмерно наблюдение. Методът на многофотонно флуоресцентно възбуждане използва червена светлина с дълга дължина на вълната или близка инфрачервена светлина за събиране на флуоресцентни изображения с висока разделителна способност на проби, което причинява минимални щети на живи екземпляри. Поради това е подходящ за изобразяване на живи клетки, особено на дебели живи тъкани като мозъчни срезове, ембриони и др. Образни изследвания на цели органи или дори цели тела.
Предимствата са както следва:
1. Използвайте червена светлина или инфрачервена светлина за възбуждане и разсейването на светлината е малко (разсейването на малки частици е обратно пропорционално на четвъртата степен на дължината на вълната).
2. Не е необходима дупка и могат да бъдат събрани повече разпръснати фотони от напречното сечение на изображението.
3. Точковата дупка не може да различи разпръснатите фотони, излъчвани от дефокусираната зона или зоната на фокусиране, а съотношението сигнал/шум при многофотонно изображение в дълбоките слоеве е добро.
4. Ултравиолетовата или видимата светлина, използвана за еднофотонно възбуждане, лесно се абсорбира и отслабва от пробата, преди лъчът да достигне фокалната равнина, и е трудно да възбуди дълбоки слоеве.
5. По отношение на наблюдението с биологичен микроскоп, първото съображение е да не се уврежда активното състояние на самия организъм и да се поддържа потокът на вода, концентрацията на йони, кислород и хранителни вещества. В случай на наблюдение на светлина, както топлината, така и фотонната енергия трябва да останат в рамките на количеството на облъчване и светлинната енергия, така че клетките да не бъдат повредени.
6. Многофотонната микроскопия също има много предимства. Например, по отношение на триизмерна разделителна способност, проникване в дълбочина, ефективност на разсейване, фонова светлина, съотношение сигнал/шум, контрол и т.н., има трансцендентни характеристики, които предишните лазерни микроскопи нямаха или не можеха да съпоставят.
Многофотонната конфокална лазерна сканираща микроскопия е разширена до различни изследователски и приложни области. Той може да провежда триизмерно безразрушително наблюдение на проби в тяхното естествено състояние и може да подобри разделителната способност и съотношението сигнал/шум на системата. Използване на материали за многофотонно възбуждане Промените в свойствата могат също да реализират триизмерно съхранение на данни за височина и триизмерна микрообработка във всяка посока, което има висока стойност на приложение. Смята се, че с по-нататъшното развитие на машини, материали, лазерна технология и т.н., свързани с многофотонната конфокална микроскопия, повече фотонната конфокална лазерна сканираща микроскопия ще получи по-голямо развитие и по-широко приложение.
Недостатъците са както следва:
1. Може да изобразява само флуоресценция.
2. Ако пробата съдържа хромофори, които могат да абсорбират възбуждаща светлина, като пигменти, пробата може да се повреди от топлина.
3. Резолюцията е леко намалена. Въпреки че може да се подобри чрез използване на конфокални дупки по едно и също време, ще има загуба на сигнал.
4. Ограничена от скъпи свръхбързи лазери, цената на многофотонните сканиращи микроскопи е относително висока.
