Въведение в предимствата и недостатъците на лазерната сканираща многофотонна микроскопия
Предимства на мултифотонен лазерен сканиращ микроскоп:
1. В възбудено от червена или инфрачервена светлина, разсейването на светлината е малко, а разсейването на малки частици е обратно пропорционално на четвъртата сила на дължината на вълната.
2. Повече разпръснати фотони от напречното сечение на изображения могат да бъдат събрани без нужда от щифтове.
3. Пинхолите не могат да различават разпръснатите фотони, излъчвани от дефокусирани или фокални области, и многофотоните имат по-добро съотношение сигнал / шум при дълбоки изображения.
4. Ултравиолетовата или видимата светлина, използвана за възбуждане на единично фотон, лесно се абсорбира и атенюира от пробата, преди лъчът да достигне до фокусната равнина, което затруднява възбуждането на дълбоки слоеве.
5. По отношение на наблюдението на биологичната микроскопия, първото внимание е да не се увреди активното състояние на самия организъм, да се поддържа циркулацията на водата, концентрацията на йони, кислорода и хранителните вещества. В областта на наблюдението на светлината както термичната, така и енергията на фотоните трябва да останат в рамките на дозата на облъчване и светлинната енергия, които не увреждат клетките.
6. Мултифотонната микроскопия има много предимства. По отношение на триизмерната разделителна способност, инвазията на дълбочината, ефективността на разсейване, фоновата светлина, съотношението сигнал / шум, контрол и т.н., има характеристики, които предишните лазерни микроскопи не притежават или не могат да надминат
Недостатъци на мултифотонен лазерен сканиращ микроскоп:
1. Само за флуоресцентно изображение.
2. Ако пробата включва хромофори, които могат да абсорбират светлината на възбуждане, пробата може да бъде подложена на термично увреждане.
3. Разделителната способност е леко намалена, въпреки че може да бъде подобрена чрез едновременно използване на конфокални малки дупки, има загуба на сигнал.
4. Поради ограниченията на скъпите ултрабързи лазери, цената на многофотонните сканиращи микроскопи е сравнително висока.
