Принцип на работа на лазерния конфокален микроскоп
Принцип на работа на лазерния конфокален микроскоп
Лазерният конфокален микроскоп Olympus е детектор, който може да улавя сигнали. Неговият принцип на работа е, че точков източник на светлина ще бъде изобразен като разширено петно, наречено "Airy disk", след преминаване през флуоресцентен микроскоп. В стандартен интерферометричен конфокален микроскоп с бяла светлина светлината, излъчвана извън фокалната равнина, се блокира от дупка, чийто размер определя каква част от диска на Airy може да влезе в детектора. Колкото по-малка е дупката, толкова по-рязко е полученото изображение и толкова по-слабо е изображението, тъй като по-голямата част от светлината се губи. Колкото по-малка е дупката на блендата, толкова по-добра е разделителната способност, но - отново - толкова повече светлинен сигнал се губи. Лазерният конфокален микроскоп Olympus може да осигури цветно CCD изображение и лазерно сканиращо конфокално изображение едновременно. Конфокалните лазерни микроскопи на Olympus са в състояние да измерват височина чрез конфокална настройка от един източник на светлина, една проба и един детектор. Когато пробата е разположена във фокалната равнина на лещата на обектива и лазерната светлина, отразена от повърхността на пробата, се фокусира в конфокалната апертура, фотодетекторът ще получи сигнала от пробата. Когато пробата е в позиция извън фокус, конфокалната бленда не получава лазерния сигнал, така че се събира само сигналът във фокус. Тази функция може да реализира функцията за оптично разделяне на лазерния конфокален микроскоп Olympus.
Предимства на конфокалната лазерна микроскопия
1. Използвайки лазерна светлина като източник на светлина, след като съответните флуоресцентни сонди са маркирани, пробата се сканира точка по точка, за да се получат двуизмерни оптични изображения на напречно сечение слой по слой. Той има функцията на "клетъчна CT" и може да се поддържа от компютърен софтуер за триизмерна реконструкция за получаване на триизмерни изображения, които могат да се завъртат под всякакъв ъгъл, за да се наблюдават триизмерната форма и пространствената връзка на клетките и тъканите;
2. Може да наблюдава живи клетки и тъкани без увреждане и динамично да измерва физиологичната информация на живите клетки, като концентрация на Ca йони и pH стойност в клетките;
3. Може да измерва течливостта на клетъчната мембрана, междуклетъчната комуникация, клетъчното сливане, еластичността на цитоскелета и т.н. и може да се използва като „лек нож“ за завършване на вътреклетъчна „хирургия“. Тази технология позволява in situ динамично и количествено наблюдение и измерване на живи клетки и тъкани.
