Какъв вид микроскоп се използва, за да се види формата на микробните клетки
Събирателен термин за всички малки организми, които са трудни за наблюдение с невъоръжено око. Микроорганизмите включват бактерии, вируси, гъбички и няколко водорасли. (Някои микроорганизми обаче се виждат с невъоръжено око, като например гъбите, принадлежащи към гъбите, Ganoderma lucidum и др.) Вирусите са вид „неклетъчни организми“, съставени от няколко компонента като нуклеинови киселини и протеини, но техните оцеляването трябва да зависи от живите клетки. Според различните среди, които съществуват, те могат да бъдат разделени на прокариотни микроорганизми, космически микроорганизми, гъбични микроорганизми, дрождени микроорганизми, морски микроорганизми и др.
Ролята и вредата на микроорганизмите:
Едно от най-важните въздействия на микроорганизмите върху хората е разпространението на инфекциозни заболявания. 50 процента от човешките заболявания се причиняват от вируси. Историята на микробите, причиняващи човешки заболявания, е историята на постоянната борба на човешките същества с тях. Човешките същества са постигнали голям напредък в превенцията и лечението на заболявания, но продължават да се появяват нови и повтарящи се микробни инфекции, като например голям брой вирусни заболявания, за които липсват ефективни терапевтични лекарства. Патогенният механизъм на някои заболявания не е ясен. Злоупотребата с голям брой широкоспектърни антибиотици е причинила силен натиск за селекция, причинявайки много щамове да мутират, което води до появата на лекарствена резистентност, а човешкото здраве е застрашено от нови заплахи. Някои сегментирани вируси могат да мутират чрез рекомбинация или реасортиране. Най-характерният пример е грипният вирус.
След като знае конкретната дефиниция на микроорганизмите, какъв тип микроскоп трябва да използва експериментаторът, когато изучава микроорганизми, за да види, и какъв микроскоп може да се използва, за да се види по-добре и да се наблюдават и анализират общи микробни форми.
Изобретението на микроскопа е да може да вижда усмихнати обекти, които не могат да се видят с просто око. Размерът на микроорганизмите е много малък, така че те трябва да бъдат увеличени и наблюдавани с помощта на микроскоп. Освен това има много видове микроорганизми, така че основно повечето от оптичните микроскопи могат. За да наблюдавате микроорганизми, следващият въпрос е какъв тип микроскоп трябва да се използва за наблюдение и анализ на микроорганизми. Обичайните микроскопи за наблюдение на микробната морфология включват биологични микроскопи, фазово-контрастни микроскопи, обърнати микроскопи, флуоресцентни микроскопи и конфокални микроскопи. Микроскоп и така нататък.
По-долу са описани различните микроскопи, използвани за наблюдение на микроорганизми:
1. Обикновен светлинен микроскоп
Като източник на светлина се използва естествена светлина или светлина, чиято дължина на вълната е около {{0}}.4 μm. Разделителната способност на микроскопа е половината от дължината на вълната, т.е. 0.2 μm, а най-малкото изображение, видимо с просто око, е 0.2 mm. Следователно използването на маслено (потопяемо) огледало за увеличение 1000 пъти може да увеличи частиците от 0,2 μm до 0,2 mm, видими с просто око. Обикновените оптични микроскопи могат да се използват за наблюдение на бактерии, актиномицети и гъбички.
2. Микроскопията в тъмно поле обикновено се използва за наблюдение на неоцветена микробна морфология и движение. След като кондензаторът на тъмното поле е инсталиран в обикновения микроскоп, светлината не може да проникне директно от средата и зрителното поле е тъмно. Когато пробата получи наклонена светлина от ръба на кондензатора, тя може да се разсее, така че ярки микроорганизми могат да се наблюдават на фона на тъмното поле, като бактерии или спирохети.
3. Фазово контрастен микроскоп Фазово контрастният микроскоп използва светлинния ефект на плочата за фазова разлика, за да промени светлинната фаза и амплитудата на директната светлина и да преобразува разликата на светлинната фаза в разлика в интензитета на светлината. Под фазово-контрастен микроскоп, когато светлината преминава през неоцветен образец, разликата в светлинната фаза се причинява от несъответствието на плътността на различните части на образеца и могат да се наблюдават морфологията, вътрешната структура и начинът на движение на микроорганизмите.
4. Флуоресцентен микроскоп Флуоресцентният микроскоп е основно същият като обикновения оптичен микроскоп, основната разлика е източникът на светлина, филтърът и кондензаторът. Понастоящем повечето от тях използват епи-светлинни устройства, а като източници на светлина обикновено се използват живачни лампи с високо налягане, които могат да излъчват ултравиолетова или синьо-виолетова светлина. Има два вида филтри: филтър за възбуждане и филтър за абсорбция. В допълнение към общите кондензатори със светло поле, кондензаторите с тъмно поле могат също да се използват във флуоресцентни микроскопи, използващи синя светлина за подобряване на контраста между флуоресценцията и фона. Този метод е приложим за откриване или идентифициране на бактерии, оцветени с флуоресцентни пигменти или комбинирани с флуоресцентни антитела.
5. Електронните микроскопи използват електронен поток като източник на светлина. В сравнение с видимата светлина, дължината на вълната е десетки хиляди пъти по-различна, което значително подобрява разделителната способност. Магнитната намотка се използва като система за оптично усилване и увеличението може да достигне десетки хиляди или стотици хиляди пъти. Често се използва във вирусни частици. и наблюдение на бактериална ултраструктура.
Наблюдение на неоцветени микробни проби:
Неоцветените проби обикновено могат да се използват за наблюдение на бактериалната морфология, мощност и движение. Бактериите са безцветни и прозрачни, когато не са оцветени и се наблюдават под микроскоп главно чрез разликата между индекса на пречупване на бактериите и околната среда. Бактериите с флагели се движат енергично, докато бактериите без флагели показват неправилно брауново движение. Жизнеспособни бактерии като Treponema pallidum, Leptospira и Campylobacter имат отличителни форми и модели на движение, които са от диагностично значение. Често използваните методи са метод на падане на налягането, метод на висящо падане и капилярен метод.
1. Метод с висящи капки Нанесете вазелин около вдлъбнатия отвор на чистото вдлъбнато предметно стъкло, вземете пръстен от бактериална суспензия с примка за инокулация и го поставете в центъра на покривното стъкло, след което подравнете вдлъбнатия отвор на вдлъбнатото предметно стъкло с капката в центъра на покривното стъкло и Поставете капака, след това го обърнете бързо, леко натиснете покривното стъкло, за да залепне плътно за вазелина на ръба на вдлъбнатия отвор, и след това наблюдавайте под мощна микроскоп (или тъмно поле).
2. Вземете пръстен от бактериална суспензия с примка за инокулиране и го поставете в центъра на чисто предметно стъкло чрез метода на падане на налягането и внимателно покрийте бактериалната суспензия с покривно стъкло, като внимавате да избегнете образуването на въздушни мехурчета и да предотвратите бактериалната суспензия от преливане. Наблюдение в светло поле (или тъмно поле) под обектив с висока мощност.
3. Капилярният метод се използва главно за изследване на кинетиката на анаеробни бактерии. Обикновено избирайте дължина 60~70mm. След като сифонирате суспензията от анаеробни бактерии през капиляр с отвор 0.5-1.0 mm, запечатайте двата края на капиляра с пламък. Капилярът се фиксира върху предметното стъкло с пластмасова хартия и се наблюдава под леща с висока мощност в тъмно поле.
Наблюдение на оцветени микробни проби с микроскоп:
След оцветяването на бактериалния образец, поради резкия контраст в цвета между бактериите и околната среда, морфологичните характеристики на бактериите (като размер, форма, разположение и т.н.) на бактериите и някои специални структури могат да бъдат ясно наблюдавани под обикновен оптичен микроскоп (като капсули, флагели, спори и т.н.) и бактериите могат да бъдат класифицирани и идентифицирани според реактивността на оцветяване.
(1) Обща процедура на бактериално оцветяване Общата процедура на бактериално оцветяване е: намазка (изсушаване)—фиксация—оцветяване.
1. Приготвяне на намазка от кръв, секрети, екскрети, пункционна течност и течна култура и директни тънкослойни намазки върху предметни стъкла; аутопсия или заразени животински тъкани, намажете лезията с памучен тампон за вземане на проба. За приготвяне на бактериални колонии или тревни площи върху твърда среда, първо използвайте инокулационна примка, за да вземете пръстен с нормален физиологичен разтвор и да го поставите в центъра на предметното стъкло, след това използвайте стерилна инокулационна примка, за да вземете малко количество култура и да я смилате равномерно в нормален физиологичен разтвор и го разнесете върху 1 cm2 големи или малки боядисани повърхности, оставете да изсъхне естествено при стайна температура или изсъхне бавно на разстояние.
2. Целта на фиксацията е да убие бактериите, да коагулира бактериалния протеин и структура и да улесни оцветяването; насърчават бактериите да се придържат към предметното стъкло, за да се избегне отмиването им от вода по време на измиване; променят пропускливостта на бактериите към багрилата, което е от полза за структурата на бактериалните клетки на оцветяване. Обикновено се фиксира чрез нагряване на пламък, като изсъхналото петно се прекарва бързо през пламъка 3 пъти. По-добре е да не изгаряте кожата на гърба на ръката, когато докоснете предметното стъкло.
3. Боядисване Според различните цели на инспекция, изберете различни методи за боядисване за боядисване. При боядисване добавете разтвора на багрилото на капки, за да увеличите покривността.
4. Морилка Всяко вещество, което може да засили афинитета между багрилото и боядисания обект, да фиксира багрилото върху боядисания обект и да причини промяна в пропускливостта на клетъчната мембрана, се нарича морилка. Обикновено се използват стипца, танинова киселина, метални соли и йод и др., а нагряването също се използва за насърчаване на оцветяването. Морилките могат да се използват между първичното оцветяване и контраоцветяването и могат да се използват и след фиксация или да се съдържат във фиксатора и оцветяването.
5. Обезцветяване Всеки химичен агент, който може да премахне цвета на боядисания предмет, се нарича обезцветител. Като обезцветители обикновено се използват етанол, ацетон и др. Обезцветяващият агент може да открие степента на стабилност на комбинацията от бактерии и багрила, която може да се използва за диференциално оцветяване.
6. Контраоцветяване Бактериите или техните структури, които са били обезцветени, често се контраоцветяват с противооцветяващ разтвор за лесно наблюдение. Цветът на разтвора за контраоцветяване е различен от този на разтвора за първично боядисване, за да образува рязък контраст. Контраоцветяването не трябва да е много силно, за да не прикрие цвета на първоначалното оцветяване.
