Използване на флуоресцентна микроскопия: техники и умения
Технически параметри на флуоресцентен микроскоп 1. Широкоъгълен окуляр 2. Ахроматична леща на обектива 3. Конвертор на обектива с четири отвора 4. Епи-флуоресцентно устройство Синя (B) Зелена (G) система за възбуждане 100W живачна лампа 5. Коаксиален механизъм за грубо и фино регулиране на фокуса: регулиране Диапазон на фокусиране: 15 mm Стойност на решетка с микро-движение: 0,002 mm 6. Двуслойна механична маса Диапазон на надлъжно движение: 70 mm Диапазон на странично движение: 50 mm
Използвайте метода на уменията
(1) Стъклен предмет
Дебелината на предметното стъкло трябва да бъде между 0,8 и 1,2 мм. Прекалено дебело предметно стъкло ще абсорбира повече светлина от една страна, а от друга страна възбуждащата светлина не може да се концентрира върху образеца. Предметните стъкла трябва да са гладки, с еднаква дебелина и без видима автофлуоресценция. Понякога се използват предметни стъкла от кварцово стъкло.
(2) Покривно стъкло
Дебелината на покривното стъкло е около 0,17 мм, гладко. За да се усили възбуждащата светлина, може да се използва и интерферентно покривно стъкло, което е специално покривно стъкло, покрито с няколко слоя вещества (като магнезиев флуорид), които имат различни интерферентни ефекти върху светлина с различни дължини на вълната, което може да направи флуоресценцията върви гладко. Вълнуващата светлина преминава през и се отразява и тази отразена възбуждаща светлина възбужда образеца.
(3) Образец
Тъканните срезове или други проби не трябва да са твърде дебели. Ако е твърде дебел, по-голямата част от възбуждащата светлина ще се консумира в долната част на образеца, докато горната част, пряко наблюдавана от лещата на обектива, няма да бъде напълно възбудена. В допълнение, припокриването на клетките или покритието с примеси влияят на преценката.
(4) Монтажно средство
Глицеринът обикновено се използва като монтиращ агент, който не трябва да има автофлуоресценция, безцветен и прозрачен, а яркостта на флуоресценцията е по-ярка при pH 8.5-9.5 и не е лесно да избледнее бързо. Следователно като монтиращ агент обикновено се използва равна смес от глицерол и 0.5mol/l карбонатен буферен разтвор с рН от 9.0 до 9,5.
(5) масло за огледало
Обикновено, когато се наблюдават проби с флуоресцентни микроскопи с тъмно поле и маслени имерсионни лещи, трябва да се използва имерсионно масло. Най-добре е да използвате специално нефлуоресцентно потапящо масло. Горният глицерин също може да се използва вместо него, както и течен парафин, но индексът на пречупване е нисък, което има леко влияние върху качеството на изображението. Влияние.
