Разликата между флуоресцентна и лазерна конфокална микроскопия
флуоресцентен микроскоп
1. Флуоресцентният микроскоп е устройство, което използва ултравиолетова светлина като източник на светлина за осветяване на обекта, който се тества, карайки го да излъчва флуоресценция и след това наблюдава формата и позицията на обекта под микроскопа. Флуоресцентната микроскопия се използва за изследване на абсорбцията, транспортирането, разпределението и локализирането на вещества в клетките. Някои вещества в клетките, като хлорофил, могат да излъчват флуоресценция след излагане на ултравиолетова радиация; Някои вещества сами по себе си може да не излъчват флуоресценция, но ако са оцветени с флуоресцентни багрила или флуоресцентни антитела, те също могат да излъчват флуоресценция при ултравиолетово лъчение. Флуоресцентната микроскопия е един от инструментите за качествено и количествено изследване на тези вещества.
2. Принцип на флуоресцентния микроскоп:
(A) Източник на светлина: Източникът на светлина излъчва светлина с различни дължини на вълната (от ултравиолетова до инфрачервена).
(B) Възбуждащ филтърен източник на светлина: предаване на светлина с определена дължина на вълната, която може да произведе флуоресценция в образеца, като същевременно блокира светлина, която е безполезна за възбуждаща флуоресценция.
(C) Флуоресцентни проби: обикновено се оцветяват с флуоресцентни пигменти.
(D) Блокиращ филтър: селективно предава флуоресценцията, като блокира възбуждащата светлина, която не е била абсорбирана от образеца, а някои дължини на вълните също се предават селективно при флуоресценцията. Микроскоп, който използва ултравиолетова светлина като източник на светлина, за да излъчва флуоресценция от облъчения обект. Електронният микроскоп е сглобен за първи път от Knorr и Harroska в Берлин, Германия през 1931 г. Този тип микроскоп използва високоскоростен електронен лъч вместо лъч светлина. Поради много по-късата дължина на вълната на електронния поток в сравнение със светлинните вълни, увеличението на електронния микроскоп може да достигне 800000 пъти, с минимална граница на разделителна способност от 0,2 нанометра. Сканиращият електронен микроскоп, който започва да се използва през 1963 г., позволява на хората да виждат малките структури на повърхността на обектите.
3. Обхват на приложение: Използва се за уголемяване на изображения на малки обекти. Обикновено се използва за наблюдение на биология, медицина, микроскопични частици и др.
конфокален микроскоп
1. Конфокален микроскоп добавя полурефлективна леща към пътя на отразената светлина, която огъва отразената светлина, която вече е преминала през лещата в други посоки. Има преграда с дупка във фокусната си точка, а малката дупка е разположена във фокусната точка. Зад преградата има фотоумножителна тръба. Може да си представим, че отразената светлина преди и след фокусната точка на светлината за откриване не може да бъде фокусирана върху малката дупка през тази конфокална система и ще бъде блокирана от преградата. Така че фотометърът измерва интензитета на отразената светлина във фокусната точка.
2. Принцип: Традиционните оптични микроскопи използват полеви източници на светлина и изображението на всяка точка върху образеца ще бъде повлияно от дифракция или разсеяна светлина от съседни точки; Лазерно сканиращият конфокален микроскоп използва лазерен лъч, за да образува точков светлинен източник през осветена дупка, за да сканира всяка точка във фокалната равнина на образеца. Осветената точка върху образеца се изобразява в отвора за откриване и се получава точка по точка или линия от фотоумножителна тръба (PMT) или термоелектрическо свързващо устройство (cCCD) след отвора за откриване, бързо образувайки флуоресцентно изображение на компютърния монитор екран. Точковият отвор за осветяване и откриващият отвор са спрегнати спрямо фокалната равнина на лещата на обектива. Точките във фокалната равнина се фокусират едновременно върху отвора за осветяване и отвора за излъчване, а точките извън фокалната равнина няма да бъдат изобразени в отвора за откриване. Това води до конфокално изображение, което представлява оптичното напречно сечение на образеца, преодолявайки недостатъка на замъглените изображения при конвенционалната микроскопия.
3. Области на приложение: включващи медицина, изследване на животни и растения, биохимия, бактериология, клетъчна биология, тъкани и ембриони, наука за храните, генетика, фармакология, физиология, оптика, патология, ботаника, неврология, морска биология, материалознание, електронна наука, механика, петролна геология и минералогия.
