Умения и методи за работа с флуоресцентен микроскоп
Технически параметри на флуоресцентен микроскоп 1. Широкоъгълен окуляр 2. Ахроматичен обектив 3. Преобразувател на обектив с четири отвора 4. Излъчващо флуоресцентно устройство синьо (b) зелено (g) система за възбуждане 100W живачна лампа 5. Коаксиален груб механизъм за микрофокусиране: обхват на фокусиране 15 мм, стойност на микрорешетката 0,002 мм 6. Надлъжно движение на двуслойна механична работна маса: 70 мм, странично движение на обхват: 50 мм.
Умения и методи за работа с флуоресцентен микроскоп
(1) стъклени слайдове
Дебелината на слайда трябва да бъде между 0.8-1.2 mm и 1,2 mm. Прекалено дебелото предметно стъкло няма да абсорбира много светлина, от една страна, и няма да накара възбуждащата светлина да се събере върху образеца, от друга. Стъклото трябва да е гладко, с еднаква дебелина и без видима спонтанна флуоресценция. Понякога са необходими предметни стъкла Shi Ying.
(2) Покривно стъкло
Покривното стъкло е с дебелина около 0,17 мм и е гладко. За да се подобри възбуждащата светлина, може да се използва и интерферентно покривно стъкло, което е вид специално покривно стъкло с няколко слоя вещества (като магнезиев флуорид), които имат различни интерферентни ефекти върху различните дължини на вълната на светлината. Той може да накара флуоресценцията да премине плавно и да отрази възбуждащата светлина, а тази отразена възбуждаща светлина може да възбуди образеца.
(3) Образци
Тъканните срезове или други проби не трябва да са твърде дебели. Ако е твърде дебел, по-голямата част от възбуждащата светлина се консумира в долната част на образеца, докато горната част, пряко наблюдавана от лещата на обектива, не се възбужда напълно. В допълнение, припокриването на клетките или маскирането на примеси влияе върху преценката.
(4) запечатващ агент
Глицеролът обикновено се използва като запечатващ агент, който трябва да бъде безцветен и прозрачен без спонтанна флуоресценция. Яркостта на флуоресценцията е ярка при pH 8,5 ~ 9,5 и не е лесно да избледнее бързо. Следователно еквивалентната смес от глицерол и 0.5 mol/l PH9.0 ~ 9.5 карбонатен буфер често се използва като запечатващ агент.
(5) масло за огледало
По принцип трябва да се използва огледално масло, когато се наблюдават проби с флуоресцентен микроскоп с тъмно поле и маслено огледало. Най-добре е да използвате специално нефлуоресцентно масло за огледала или вместо него може да използвате горния глицерин. Може да се използва и течен парафин, но коефициентът на пречупване е нисък, което има леко влияние върху качеството на изображението.
