Изисквания за дебелината на оптичния микроскоп за предметни стъкла
Микроскопска дехидратация и прикрепване на пробата: Поради многократно центрофугиране, клетките се губят, така че е най-добре да се прикрепят клетките към повърхността на предметно стъкло или пластмасов лист за оптична микроскопия, така че клетките да бъдат дехидратирани и изсушени заедно със стъклото слайд или пластмасов лист. Изисквания за дебелината на предметните стъкла в оптичната микроскопия За да могат клетките да се прикрепят към предметни стъкла или пластмасови листове, е необходимо първо да се постави слой филм върху предметни стъкла или пластмасови листове. Методът за полагане на филма е както следва:
(1) Най-простият метод за оптична микроскопия е да се постави тънък слой от поливинил формален (formvar) филм. Накиснете почистените слайдове в (0.5-1) процентен разтвор на поливинил формален хлороформ. След като атмосферата се изпари, върху слайдовете се появява бял филм. Разклатете предметните стъкла няколко пъти в хлороформа, за да промените филма. Тънък и готов за употреба.
(2) Капнете 0.1 latitude поли-L-лизин (разтворете 1 mg поли-лизин в 1 ml филтрирана вода по време на приготвянето) върху почистеното предметно стъкло и го поставете в кутия за доставка на 450C, след като капката се разгъне . суха. Този метод е най-добрият, тъй като поли-L-лизинът е положително зареден, което позволява повече повърхностни отрицателно заредени клетки да се прикрепят.
(3) Добавете плазма и глицерол към дестилирана вода в съотношение (30--40) процента и (3-5) процента според изискванията на оптичния микроскоп за дебелината на предметното стъкло, за да се образува глицеринов протеин решение. Течността се накапва върху почистеното предметно стъкло, разгъва се и се изсушава под оптичния микроскоп. Положеният протеинов филм се потапя в 2 процента глутаралдехид за фиксиране на протеина, измива се и се изсушава за по-късна употреба. Преди употреба плазмата се накапва върху протеиновия филм. Направете го "активиран", изплакнете с буфер след 30 минути и може да се нанесе директно.
Фиксираните и почистени клетки се превръщат в подходяща концентрация на клетъчна суспензия с филтрирана вода под цифров микроскоп, а оптичният микроскоп се поставя върху предметно стъкло или пластмасов лист, който е покрит с мембрана, и се поставя във влажна, ниска температура (40C) среда (30-120) минути, за да позволи на клетките да се прикрепят към мембраната. Използвайте фини пинсети, за да вземете предметното стъкло и го разклатете в чиста двойно дестилирана вода и отмийте неприкрепените клетки с оптичен микроскоп. Изисквания за дебелината на предметните стъкла в оптичните микроскопи След това поляризационните микроскопи бързо се поставят в съд, пълен с 50 процента ацетон (или етанол). Процесът на дехидратиране се състои в поставяне на предметните стъкла в ацетон или етанол с нарастваща концентрация на всеки 3 минути и чрез оптичен микроскоп или непрекъснато увеличаване на концентрацията на дехидратиращия агент в контейнера за стъклени предметни стъкла. Според лабораторния опит на автора, последната операция е по-удобна. Специфичният метод на оптична микроскопия може да изсмуче половината от дехидратиращия агент в контейнера на всеки 3 минути и след това да добави равно количество дехидратиращ агент с концентрация от 100 процента. След 5-6 операции концентрацията на дехидратиращия агент в съда на микроскопа достига над 0,5 процента и клетките се дехидратират успешно. След изсушаване на критичната точка предметното стъкло или пластмасовият лист се залепват към стълба на пробата с проводимо лепило за метално покритие. Има и удобства за прикрепване на клетки към мембрани, положени по третия метод. Оптичният микроскоп може да окачи клетките, фиксирани с ниска концентрация на глутаралдехид върху "активирания" протеинов филм. Оптичният микроскоп изисква дебелината на предметното стъкло да се постави за 10 минути, а предметното стъкло или пластмасовият лист се накисват в 2 процента глутаралдехид. След 30 минути изплакнете с филтрирана двойно дестилирана вода и след това дехидратирайте, изсушете и нанесете метално покритие съгласно горния метод.
