Познания за конфокална флуоресцентна микроскопия
Основният принцип на конфокалната флуоресцентна микроскопия: използва се точков източник на светлина за облъчване на образеца и върху фокалната равнина се образува добре дефинирано малко светлинно петно. съставен от сплитери. Разделителят на лъча изпраща флуоресценцията директно към детектора. Има дупка пред източника на светлина и детектора, съответно наречена дупка за осветяване и дупка за откриване. Геометричният размер на двете е еднакъв, около 100-200nm; по отношение на светлинното петно във фокалната равнина, двете са спрегнати, т.е. светлинното петно преминава през серия от лещи и накрая може да бъде фокусирано върху отвора за осветяване и отвора за откриване едновременно. По този начин светлината от фокалната равнина може да се събира в обхвата на отвора за откриване, докато разсеяната светлина отгоре или под фокалната равнина се блокира извън отвора за откриване и не може да бъде изобразена. Лазерът сканира пробата точка по точка и фотоумножителната тръба след откриване на дупката също получава конфокално изображение на съответната светлинна точка точка по точка, което се преобразува в цифров сигнал и се предава на компютъра и накрая се агрегира в ясен конфокално изображение на цялата фокална равнина на екрана.
Всяко изображение във фокална равнина всъщност е оптично напречно сечение на образеца и това оптично напречно сечение винаги има определена дебелина, известна също като оптичен тънък участък. Тъй като интензитетът на светлината във фокусната точка е много по-голям от този в нефокусната точка и светлината от нефокалната равнина се филтрира от дупката, дълбочината на рязкост на конфокалната система е приблизително нула и сканирането по Z -ос може да реализира оптична томография, образувайки Наблюдавайте двуизмерното оптично сечение във фокусираното място на пробата. Комбинирайки сканиране на XY равнина (фокална равнина) със сканиране по Z-ос (оптична ос), триизмерното изображение на пробата може да бъде получено чрез натрупване на двуизмерни изображения на непрекъснати слоеве и обработено от специален компютърен софтуер.
