Въведение в предимствата и недостатъците на многофотонната лазерна сканираща микроскопия
1. Използвайки червена светлина или инфрачервена светлина за възбуждане, разсейването на светлината е малко, а разсейването на малки частици е обратно пропорционално на четвъртата степен на дължината на вълната.
2. Повече разпръснати фотони от напречното сечение на изображението могат да бъдат събрани без необходимост от дупки.
3. Точковата дупка не може да различи разпръснатите фотони, излъчвани от дефокусираната зона или зоната на фокусиране, а съотношението сигнал/шум при многофотонно изображение в дълбоките слоеве е добро.
4. Ултравиолетовата или видимата светлина, използвана за еднофотонно възбуждане, лесно се абсорбира и отслабва от пробата, преди лъчът да достигне фокалната равнина, и е трудно да възбуди дълбоки слоеве.
5. По отношение на наблюдението с биологичен микроскоп, първото съображение е да не се уврежда активното състояние на самия организъм и да се поддържа потокът на вода, концентрацията на йони, кислород и хранителни вещества. В случай на наблюдение на светлина, както топлината, така и фотонната енергия трябва да останат в рамките на количеството на облъчване и светлинната енергия, така че клетките да не бъдат повредени.
6. Многофотонната микроскопия има много предимства. Като триизмерна разделителна способност, проникване в дълбочина, ефективност на разсейване, фонова светлина, съотношение сигнал/шум, контрол и т.н., всички имат характеристики, които предишните лазерни микроскопи нямаха или не можеха да се сравнят с тях.
Недостатъци на многофотонната лазерна сканираща микроскопия:
1. Може да изобразява само флуоресценция.
2. Ако пробата съдържа хромофори, които абсорбират възбуждаща светлина, пробата може да бъде термично повредена.
3. Резолюцията е леко намалена. Въпреки че може да се подобри чрез използване на конфокални дупки по едно и също време, има загуба на сигнал.
4. Ограничена от скъпи свръхбързи лазери, цената на многофотонните сканиращи микроскопи е относително висока.
