Как да изберем правилния флуоресцентен микроскоп
Флуоресцентният микроскоп е стандартно оборудване за микроскопични изображения за лаборатории и отделения по патология. Той използва флуоресцентни характеристики за наблюдение и изобразяване. Той се използва широко в клетъчната биология, невробиологията, ботаниката, микробиологията, патологията, генетиката и други области. Флуоресцентното изобразяване има предимствата на висока чувствителност и висока специфичност и е много подходящо за наблюдение на разпределението на специфични протеини и органели в тъкани и клетки, изследване на колокализация и взаимодействие, проследяване на динамични процеси в живота, като промени в концентрацията на йони и т.н.
Избор на микроскоп
Флуоресцентните микроскопи се разделят основно на три категории: изправени флуоресцентни микроскопи (подходящи за срезове), обърнати флуоресцентни микроскопи (подходящи за живи клетки, като се вземе предвид срезовете), стереоскопични флуоресцентни микроскопи (подходящи за по-големи екземпляри, като растения, риба зебра (възрастни/ ембрион), медака, органи на мишка/плъх и др.).
Избор на флуоресцентни филтърни кубове
В допълнение към отчитането на дължините на вълните на възбуждане и излъчване на флуоресцентни сонди, изборът на филтърни блокове също трябва да вземе предвид дали има неспецифично възбуждане и кръстосано оцветяване за многоцветно маркирани проби. В експеримента ще се опитаме да изберем дължината на вълната, която е най-близка до пика на възбуждане за възбуждане, а обхватът на приемане трябва да включва пика на излъчване. Например, пикът на възбуждане на Alexa Fluor 488 е 500 nm и филтър за възбуждане 480/40 може да бъде избран във флуоресцентен микроскоп. Флуоресцентните филтърни кубчета, които обикновено се използват във флуоресцентните микроскопи, могат да бъдат разделени на два типа: дългопропускащи (LP за къси) и лентови пропускащи (BP за къси), които също трябва да бъдат избрани според нуждите.
Избор на източник на флуоресцентна светлина
Понастоящем често използваните флуоресцентни източници на светлина включват живачни лампи, металхалогенни лампи и LED източници на светлина, които се развиха бързо през последните години. Спектърът на флуоресцентния източник на светлина е непрекъснат и прекъснат и енергията ще бъде различна в различните ленти. Поради сравнително тясната си спектрална лента, по-стабилен енергиен изход, дълъг живот, безопасност и защита на околната среда и много други предимства, LED светлинният източник постепенно се превръща в основен източник на светлина на флуоресцентния микроскоп.
конфокален микроскоп
При традиционното наблюдение с флуоресцентен микроскоп, поради припокриването на флуоресцентни маркерни вещества и автофлуоресцентни структури, те са тясно комбинирани, докато лещата на традиционния епи-флуоресцентен микроскоп не само събира светлина от фокалната равнина, но също така събира разсеяна светлина над и под фокална равнина, което води до силно намалена разделителна способност и контраст на изображението.
Конфокалното изобразяване решава този проблем, като открива само частта от светлината, отразена от фокалната равнина. Източникът на светлина преминава през дупка, за да образува малко и фино светлинно петно върху фокалната равнина. Светлината, излъчвана от фокалната равнина, се събира от лещата на обектива. По-голямата част от флуоресценцията, излъчвана от точката над или под фокалната равнина на лещата на обектива, не може да се събере към малкия отвор. Само флуоресценцията, разположена във фокалната равнина, и малка част от флуоресценцията извън фокуса могат да преминат през отвора, докато светлинните лъчи извън фокалната равнина се събират в предната или задната част на плочата с отвора и са блокирани от навлизане в детектора през дупката. Откритото изображение е изображението от фокалната равнина, така че качеството на крайното изображение е значително подобрено.
Благодарение на предимствата и приложимостта на функциите на лазерно сканиращия конфокален микроскоп, конфокалният микроскоп е незаменим експериментален помощник в областта на високопрецизната клетъчна биология, ботаника и клетъчни изследвания. В същото време в бъдещия център за научни изследвания това ще бъде най-основният и основен инструмент за научни изследвания.
