Как флуоресцентната микроскопия се различава от конфокалната лазерна микроскопия
Флуоресцентен микроскоп
1. Флуоресцентният микроскоп използва ултравиолетова светлина като източник на светлина за осветяване на обекта, който се проверява, за да го накара да излъчва флуоресценция, след което наблюдава формата и местоположението на обекта под микроскопа. Флуоресцентната микроскопия се използва за изследване на абсорбцията и транспорта на вещества в клетките, както и разпределението и позиционирането на химически вещества. Някои вещества в клетките, като хлорофила, могат да флуоресцират след облъчване с ултравиолетови лъчи; някои вещества сами по себе си не могат да флуоресцират, но ако се оцветят с флуоресцентни багрила или флуоресцентни антитела, те могат да флуоресцират след облъчване с ултравиолетови лъчи. Флуоресцентната микроскопия е един от инструментите за качествено и количествено изследване на такива вещества.
2. Принцип на флуоресцентния микроскоп:
(A) Източник на светлина: Източникът на светлина излъчва светлина с различни дължини на вълната (от ултравиолетова до инфрачервена).
(B) Възбуждащ филтърен източник на светлина: предава светлина с определена дължина на вълната, която може да накара пробата да флуоресцира, като същевременно блокира светлина, която е безполезна за стимулиране на флуоресценцията.
(C) Флуоресцентни проби: Обикновено се оцветяват с флуоресцентни пигменти.
(D) Блокиращ филтър: Блокира възбуждащата светлина, която не се абсорбира от образеца и селективно пропуска флуоресценция. Някои дължини на вълните във флуоресценцията също се предават избирателно. Микроскоп, който използва ултравиолетова светлина като източник на светлина, за да накара осветения обект да флуоресцира. Електронният микроскоп е сглобен за първи път през 1931 г. в Берлин, Германия от Нор и Халовска. Този микроскоп използва високоскоростен електронен лъч вместо светлинен лъч. Тъй като дължината на вълната на електронния поток е много по-къса от тази на светлината, увеличението на електронния микроскоп може да достигне 800,000 пъти, а минималната граница на разделителна способност е 0,2 нанометра. Сканиращият електронен микроскоп, който започва да се използва през 1963 г., позволява на хората да виждат малките структури на повърхността на обектите.
3. Обхват на приложение: Използва се за уголемяване на изображения на малки обекти. Обикновено се използва при наблюдение на биология, медицина, микроскопични частици и др.
конфокален микроскоп
1. Конфокалният микроскоп добавя полурефлективна полулеща към оптичния път на отразената светлина, която пречупва отразената светлина, преминала през лещата в други посоки. Има преграда с отвор във фокуса, а отворът е разположен. Във фокусната точка, зад преградата, е фотоумножителна тръба. Може да си представим, че отразената светлина преди и след светлинния фокус на детекцията преминава през тази конфокална система и не може да бъде фокусирана върху малката дупка и ще бъде блокирана от преградата. Така че това, което фотометърът измерва, е интензитетът на отразената светлина във фокуса.
2. Принцип: Традиционните оптични микроскопи използват полеви източници на светлина и изображението на всяка точка върху образеца ще бъде повлияно от дифракция или разсеяна светлина от съседни точки; лазерно сканиращите конфокални микроскопи използват лазерни лъчи, за да образуват точкови светлинни източници през осветяващи дупки, за да осветят вътрешността на образеца. Всяка точка от фокалната равнина се сканира и осветената точка върху образеца се изобразява в отвора за откриване, който се получава точка по точка или линия по линия от фотоумножителната тръба (PMT) или студено свързващо устройство (cCCD) зад детекцията дупка и бързо се образува флуоресцентно изображение на екрана на компютърния монитор. Точковият отвор за осветяване и откриващият отвор са спрегнати спрямо фокалната равнина на лещата на обектива. Точките във фокалната равнина са фокусирани едновременно върху отвора за осветяване и отвора за излъчване. Точки извън фокалната равнина няма да бъдат изобразени в дупката за откриване. Това се получава. Конфокалните изображения са оптични напречни сечения на образци, преодоляващи недостатъците на размазаните изображения в обикновените микроскопи.
3. Области на приложение: Включващи медицина, научни изследвания върху животни и растения, биохимия, бактериология, клетъчна биология, тъканна ембриология, хранителни науки, генетика, фармакология, физиология, оптика, патология, ботаника, неврология, морска биология и наука за материалите, електронни науки , механика, петролна геология, минералогия.
