Метод за откриване на флуоресцентна микроскопия
флуоресцентен микроскоп
Флуоресцентната микроскопия е основен инструмент за имунофлуоресцентната цитохимия. Състои се от основни компоненти като източник на светлина, система от филтърни плочи и оптична система. Той използва определена дължина на вълната на светлината, за да възбуди образеца и да излъчи флуоресценция, която се увеличава чрез система от обектив и окуляр, за да се наблюдава флуоресцентното изображение на образеца (Фигура 1).
(1) Източник на светлина
В днешно време като източник на светлина обикновено се използва живачна лампа със свръхвисоко налягане от 200 W. Изработен е от кварцово стъкло, със сферична форма в средата и определено количество живак, запълнено вътре. По време на работа разрядът между двата електрода кара живака да се изпари и налягането вътре в сферата бързо се увеличава. Когато живакът се изпари напълно, той може да достигне 50-70 стандартно атмосферно налягане, което обикновено отнема около 5-15 минути. Луминесценцията на живачните лампи със свръхвисоко налягане е резултат от разряда между електродите, който непрекъснато дисоциира и редуцира живачните молекули и излъчва фотони. Той излъчва силна ултравиолетова и синя виолетова светлина, която е достатъчна за възбуждане на различни флуоресцентни вещества, поради което се използва широко във флуоресцентни микроскопи.
Предпазни мерки при използване на флуоресцентен микроскоп
(1) Следвайте стриктно инструкциите на производителя на флуоресцентния микроскоп и не променяйте произволно програмата.
(2) Проверката трябва да се извършва в тъмна стая. След като влезете в тъмната стая, свържете захранването и запалете живачната лампа със свръхвисоко налягане за 5-15 минути. След като източникът на светлина излъчва силна светлина и се стабилизира, очите трябва да се адаптират напълно към тъмната стая, преди да започнете да наблюдавате образеца.
(3) За да предотвратите UV увреждане на очите, трябва да носите защитни очила, когато регулирате източника на светлина.
(4) Времето за проверка трябва да бъде 1-2 часа всеки път. Ако надвишава 90 минути, светлинният интензитет на живачната лампа със свръхвисоко налягане постепенно намалява и флуоресценцията отслабва; Проби, изложени на ултравиолетова радиация за 3-5 дни
След min, флуоресценцията също значително намалява; Следователно максималната продължителност не трябва да надвишава 2-3 часа.
(5) Продължителността на живота на светлинния източник на флуоресцентен микроскоп е ограничена и пробата трябва да се изследва централно, за да се спести време
Спестете време и защитете източника на светлина. Когато времето е горещо, трябва да се добави електрически вентилатор за разсейване на топлината и охлаждане. Когато сменяте нова електрическа крушка, времето за използване трябва да се запише от самото начало. Когато светлината е изключена и искате да я използвате отново, трябва да изчакате крушката да изстине достатъчно, преди да я запалите. Избягвайте да запалвате източника на светлина няколко пъти на ден.
(6) Наблюдавайте пробата веднага след оцветяването, тъй като флуоресценцията постепенно ще отслабне с времето. Ако пробата се съхранява в полиетиленов пластмасов плик при 4 градуса, това може да забави времето за затихване на флуоресценцията и да предотврати изпаряването на монтиращия агент.
(7) Критериите за преценка на яркостта на флуоресценцията обикновено са разделени на четири нива, а именно „едно“ – липса или видима слаба флуоресценция. "+" - Вижда се само видима флуоресценция. ++- Вижда се с ярка флуоресценция. „+++“ – Видима и ослепителна флуоресценция.
