Флуоресцентните микроскопи могат да бъдат разделени на два вида според принципа на оптичния път:
1. Трансмисионна флуоресцентна микроскоп
По -старите флуоресцентни микроскопи използват прожектор, за да възбудят флуоресценцията, като преминават източник на възбуждаща светлина през материала на образеца. Предимството му е силна флуоресценция при ниско увеличение, но недостатъкът му е, че флуоресценцията му намалява с увеличаване на увеличението. Така че е подходящ само за наблюдение на по -големи материали от образци.
2. Падащ светлинен флуоресцентен микроскоп
Светлината за възбуждане пада от обективната леща върху повърхността на образеца, като използва същата обективна леща като кондензатора за осветяване и обективния обектив за събиране на флуоресценция.
Към оптичния път трябва да се добави двоен цветен лъч (дихроично огледало), който образува 45 градусов ъгъл с оптичната ос. Светлината за възбуждане се отразява в обективния обектив и се фокусира върху пробата. Флуоресценцията, генерирана от пробата, както и светлината на възбуждане, отразена от повърхността на обективния леща и покривно стъкло, въведете едновременно обективната леща и се върнете към двойния цветен сплитер, за да разделите светлината на възбуждане и флуоресценцията. След това остатъчната светлина за възбуждане се блокира от абсорбцията на филтъра. Ако се използват различни комбинации от филтри за възбуждане, сепаратори с двоен цветен лъч и блокиращи филтри, те могат да отговорят на нуждите на различни флуоресцентни реакционни продукти.
Предимствата на този флуоресцентен микроскоп са равномерно осветление на полето, ясно изображение и по -силна флуоресценция с по -голямо увеличение.
3. Фазов контрастен микроскоп
Фазовият контрастен микроскоп е микроскоп, който може да преобразува фазовата разлика (или разликата на оптичния път), генерирана, когато светлината преминава през обект в амплитуда (интензивност на светлината) се променя. Използва се главно за наблюдение на живи клетки, неустановени тъканни участъци или оцветени образци, лишени от контраст.
Човешкото око може само да различи промените в дължината на вълната (цвета) и амплитудата на видимата светлина, но не може да различи промените във фазата. Повечето биологични образци са силно прозрачни, а амплитудата на светлинните вълни остава основно непроменена след преминаване, само с промени в фазата.
Фазовият контрастен микроскоп основно превръща оптичната разлика на пътя на видимата светлина, преминаваща през образеца в разликата в амплитудата, като по този начин подобрява контраста между различни структури и ги прави ясни и видими. След преминаване през образеца, светлината претърпява пречупване, отклонявайки се от оригиналния оптичен път и се забавя с 1/4 λ (дължина на вълната). Ако разликата в оптичния път се увеличи или намалява с още 1/4 λ, разликата на оптичния път става 1/2 λ и смущения между двата светлинни лъчи се увеличава или намалява след комбиниране на оста, подобрявайки контраста.
