Разширяване на предимствата на мултифотонната лазерна сканираща микроскопия, за да се включи
Лазерното сканиране на мултифотонния микроскоп е значително подобрение на оптичната микроскопия, проявена главно в способността да се наблюдават дълбоки структури на живите клетки, фиксираните клетки и тъканите и получават ясни и остри многослойни Z-равнинни структури, а именно оптични филийки, които могат да бъдат използвани за конструиране на триизмерни твърди структури на образци. Конфокалният микроскоп използва лазерен източник на светлина, който се разширява, за да запълни цялата фокална равнина на обективния обектив и след това се сближава в много малки точки върху фокусната равнина на образеца през системата на обектива на обективния обектив. Според числовата бленда на обективния обектив диаметърът на ярката точка на осветяване е около 0. 25-0. 8 μ m, а дълбочината е около 0. 5-1. 5 μ m. Размерът на конфокалната точка се определя от дизайна на микроскопа, дължината на лазерната вълна, обективните характеристики, настройките на състоянието на сканиращата единица и свойствата на образеца. Обхватът на осветяване и дълбочината на полевия микроскоп са големи, докато осветяването на конфокален микроскоп е фокусирано върху фокусна точка върху фокусната равнина. Основното предимство на конфокалната микроскопия е, че тя може да извърши фина оптично сечение върху дебели флуоресцентни образци (до 5 0 μm или повече), с дебелина приблизително 0,5 до 1,5 μm. Поредицата от оптични изображения на среза може да бъде получена чрез преместване на образеца нагоре и надолу с помощта на стъпковия мотор Z-ос на микроскопа. Събирането на информация за изображението се контролира в равнината * *, без смущения от сигнали, излъчвани от други позиции на образеца. След отстраняване на влиянието на фоновата флуоресценция и увеличаване на съотношението сигнал / шум, контрастът и разделителната способност на конфокалните изображения са значително подобрени в сравнение с традиционните флуоресцентни изображения на полето. В много екземпляри сложните структурни компоненти се преплитат, за да образуват сложни системи, но след като могат да се съберат достатъчно оптични секции, можем да използваме софтуер, за да ги реконструираме в три измерения. Този експериментален метод е широко използван в биологичните изследвания за изясняване на сложните структурни и функционални връзки между клетките или тъканите.
