Разлики между флуоресцентна микроскопия и конфокална микроскопия
Флуоресцентен микроскоп
1. Флуоресцентният микроскоп използва ултравиолетова светлина като източник на светлина за облъчване на обекта, който се проверява, причинявайки той да излъчва флуоресценция и след това да наблюдава формата и положението на обекта под микроскопа. Флуоресцентната микроскопия се използва за изследване на абсорбцията, транспорта, разпределението и локализацията на вещества в клетките. Някои вещества в клетки, като хлорофил, могат да флуоресцират, когато са изложени на ултравиолетово лъчение; Има и някои вещества, които сами не могат да излъчват флуоресценция, но също така могат да излъчват флуоресценция, ако са оцветени с флуоресцентни багрила или флуоресцентни антитела и облъчени с ултравиолетова светлина. Флуоресцентната микроскопия е един от инструментите за качествени и количествени изследвания на подобни вещества.
2. Принцип на флуоресцентен микроскоп:
(A) Източник на светлина: Източникът на светлина излъчва светлина с различни дължини на вълните (от ултравиолетово до инфрачервено).
(Б) Източник на светлината на филтъра за възбуждане: Предаване на светлина на специфична дължина на вълната, която може да причини флуоресценция в образеца, като същевременно блокира светлината, която е безполезна за вълнуваща флуоресценция.
(C) Флуоресцентни образци: обикновено оцветени с флуоресцентни пигменти.
(D) Блокиране на филтъра: Той селективно предава флуоресценция, като блокира светлината на възбуждане, която не се абсорбира от образеца, а някои дължини на вълната във флуоресценцията също се предават селективно. Микроскоп, който използва ултравиолетова светлина като източник на светлина, за да направи осветения обект да излъчва флуоресценция. Електронният микроскоп за първи път е сглобен от Knorr и Haruska в Берлин, Германия през 1931 г. Този микроскоп използва високоскоростни електронни греди вместо светлинни греди. Поради много по -късата дължина на вълната на електронния поток в сравнение със светлинните вълни, увеличението на електронен микроскоп може да достигне 8 0 0000 пъти, с минимална граница на разделителна способност от 0,2 нанометра. Сканиращият електронен микроскоп, който е използван за първи път през 1963 г., позволява на хората да виждат малките структури на повърхността на обектите.
3. Обхват на приложение: Използва се за разширяване на изображенията на малки обекти. Обикновено се използва за наблюдения на биология, медицина, микроскопични частици и др.
Конфокален микроскоп
1. Конфокалният микроскоп добавя полу отразяващ половин леща към отразения светлинна пътека, която отклонява отразената светлина, която е преминала през обектива в други посоки. В фокусната му точка има преграда с щипка, разположена във фокусната точка, а зад преградата е тръба за фотоумниклони. Може да се представи, че отразената светлина преди и след фокуса на светлината на откриване не може да бъде фокусирана върху малката дупка през тази конфокална система и ще бъде блокирана от преградата. Така фотометър измерва отразената интензивност на светлината във фокусната точка.
2. Принцип: Традиционните оптични микроскопи използват източници на светлина на полето, а изображението на всяка точка върху образеца се влияе от дифракция или разпръснато светлина от съседните точки; Лазерно сканиращо конфокален микроскоп използва лазерен лъч, за да осветява щифта и да образува източник на точка на светлината, за да сканира всяка точка върху фокусната равнина на образеца. Осветената точка на образеца се изобразява при откриването на отвора и се получава точка по точка или линия от фотоумноглава тръба (PMT) или студено устройство за свързване (CCCD) след откриване на дупката, бързо образувайки флуоресцентно изображение на екрана на монитора на компютъра. Осветличният отвор и отворът за откриване са конюгирани спрямо фокусната равнина на обективния обектив. Точките на фокусната равнина се фокусират едновременно върху просвещението и емисионния отвор, а точките извън фокусната равнина няма да бъдат изобразени при откриването на Pinhole. Полученото конфокално изображение е оптичното напречно сечение на образеца, преодолявайки недостатъка на замъглените изображения в общите микроскопи.
