Разлики и характеристики между флуоресцентен микроскоп и обикновен оптичен микроскоп
Флуоресцентният микроскоп е различен от обикновения оптичен микроскоп. Той не наблюдава образеца чрез осветяване на обикновен източник на светлина. Вместо това, той използва светлина с определена дължина на вълната (обикновено ултравиолетова светлина, синьо-виолетова светлина), за да възбуди флуоресцентния материал в образеца под микроскопа, което го кара да излъчва флуоресценция. Следователно източникът на светлина на флуоресцентния микроскоп не служи за директно осветление, а като източник на енергия, който възбужда вътрешния флуоресцентен материал на образеца. Причината, поради която можем да наблюдаваме образеца, не се дължи на осветяването на източника на светлина, а на феномена на флуоресценция, причинен от флуоресцентния материал в образеца, който абсорбира възбудената светлинна енергия. Може да се види, че основната характеристика на флуоресцентния микроскоп е, че неговият светлинен източник може да достави голямо количество възбуждаща светлина в определен диапазон на дължина на вълната, така че флуоресцентните вещества в изследвания образец да могат да получат необходимия интензитет на възбуждаща светлина. В същото време флуоресцентните микроскопи трябва да имат съответните филтърни системи. Флуоресцентната микроскопия е основен инструмент за напреднала флуоресцентна хистохимия. Състои се от източник на светлина със свръхвисоко налягане, филтърна система (включително филтърни плочи за възбуждане и потискане), оптична система и фотографска система. Той използва светлина с определена дължина на вълната, за да възбуди образеца да излъчва флуоресценция.
1. Начини за възбуждане на флуоресценцията: Според обхвата на дължината на вълната на светлината, тя се разделя на два вида: метод на UV възбуждане (използвайки метод на ултравиолетово осветяване) и метод на възбуждане на BV (използвайки синьо-виолетова светлина). Методът на UV възбуждане използва за възбуждане почти ултравиолетова светлина, по-къса от 400 nm. При този метод няма видима възбуждаща светлина, така че наблюдаваната флуоресценция показва присъщата флуоресценция на багрилото, което улеснява разграничаването на специфичната флуоресценция върху образеца от автофлуоресценцията на фоновата тъкан.
2. BV метод на възбуждане: възбуждане от ултравиолетова към синя светлина, центрирана при 404nm и 434nm. Този метод използва синя светлина за осветяване на образеца, така че прекъсващият филтър на системата за наблюдение на флуоресценцията трябва да използва филтър, който може напълно да блокира синята светлина и да пропуска напълно необходимата зелена и жълта флуоресценция. Флуоресцентни багрила, използвани в методите с флуоресцентни антитела. Максималната дължина на вълната на поглъщане на възбуждащата светлина и максималната дължина на вълната на излъчване на флуоресценцията са относително близки, така че филтърът, използван в метода на възбуждане на BV, трябва да използва филтър с рязко прекъсване. Този метод може да използва синя светлина като възбуждаща светлина, така че ефективността на абсорбция на флуоресцентните пигменти е по-висока и могат да се получат по-ярки изображения. Недостатъкът е, че флуоресценцията под 500 nm не може да се види, докато флуоресценцията над 500 nm кара цялото изображение да изглежда жълто. При метода на флуоресцентните антитела специфичността на флуоресцентното багрило се оценява най-вече по неговия уникален цвят. Следователно, когато се обсъжда фината специфичност, гореспоменатите недостатъци на метода за възбуждане на BV често имат голямо влияние.
