Определяне на броя на микроорганизмите-Микроскопски метод на директно броене!
Нарастването на бактериалната популация се проявява чрез увеличаване на броя на клетките или увеличаване на клетъчния материал. Методите за определяне на броя на клетките включват директно микроскопско преброяване, преброяване на плаки, оценка на мътността чрез спектрофотометър, най-вероятен брой MPN и мембранна филтрация. (мембранна филтрация) и т.н. Методите за измерване на клетъчни вещества включват определяне на сухото тегло на клетката, определяне на определени клетъчни компоненти като съдържание на азот, съдържание на РНК и ДНК и определяне на метаболитни продукти. Накратко, има много методи за измерване на микробния растеж, всеки със своите предимства и недостатъци. Методът трябва да бъде избран според специфичните изисквания на работата. Този експеримент представя главно метода на директно броене с микроскоп, който обикновено се използва в производството и научноизследователската работа.
1. Изисквания за целта
1. Изяснете принципа на броене с табло за броене на кръвни клетки.
2. Овладейте метода за преброяване на микроорганизми с помощта на табло за броене на кръвни клетки.
2. Основни принципи
Методът за директно преброяване с микроскоп е прост, бърз и интуитивен метод, който поставя малко количество суспензия от пробата за тестване върху специално предметно стъкло с определена площ и обем (наричано също бактериометър) и го брои директно под микроскоп. Методи. Понастоящем често използваните бактериометри у нас и в чужбина включват: хемоцитометър, бактериометър Peteroff-Hauser и бактериометър Hawksley и др. Всички те могат да се използват за преброяване на дрожди, бактерии, спори на плесени и други суспензии, като основните принципи са едни и същи. Последните два бактериални брояча имат общ обем 0.02 mm3, след като са покрити с покривно стъкло, а разстоянието между покривното стъкло и предметното стъкло е само 0,02 mm. Следователно обектив с потапяне в масло може да се използва за наблюдение и откриване на по-малки клетки като бактерии. броя. В допълнение към използването на тези бактериометри, има и метод за оценка, който директно наблюдава съотношението на площта на намазката към площта на зрителното поле под микроскоп. Този метод обикновено се използва за бактериологично изследване на мляко. Предимствата на метода за директно броене с микроскоп са, че той е интуитивен, бърз и лесен за работа. Недостатъкът на този метод обаче е, че измереният резултат обикновено е сбор от мъртви бактерии и живи бактерии. Понастоящем има някои методи за преодоляване на този недостатък, като комбиниране на микрокамерна култура с оцветяване на жизнеспособни бактерии (кратко време) и добавяне на инхибитори на клетъчното делене за постигане на целта за преброяване само на жизнеспособни бактерии.
Този експеримент използва хемоцитометър като пример за извършване на директно броене под микроскоп. За използването на другите два бактериометъра, моля, вижте инструкциите на всеки производител. Директното преброяване под микроскоп с помощта на хемоцитометър е често използван метод за микробно изброяване. Броещата дъска е специална пързалка с четири канала, образуващи три платформи; по-широката платформа в средата е разделена на две половини от къс хоризонтален жлеб, а от всяка страна на платформата има решетка. Всяка квадратна мрежа е разделена на девет големи квадрата, а големият квадрат в средата е стаята за броене. Структурата на таблото за броене на кръвни клетки е показана на фигура {{0}}. Обикновено има две спецификации за мащаба на камерата за броене. Единият е голям квадрат, разделен на 25 средни квадрата, а всеки среден квадрат е разделен на 16 малки квадрата (Фигура 15-2); другият е голям квадрат. Квадратната мрежа е разделена на 16 средни квадрата, а всеки среден квадрат е разделен на 25 малки квадрата. Въпреки това, без значение какъв вид е таблото за броене, във всеки голям квадрат има 400 малки квадрата. Дължината на страната на всеки голям квадрат е lmm, тогава площта на всеки голям квадрат е lmm2. След като покривното стъкло е покрито, височината между покривното стъкло и предметното стъкло е 0.lmm, така че обемът на камерата за броене е 0.lmm3 (една десет хилядна от милилитъра). Фигура 15-1 Структура на таблото за броене на кръвни клетки (1) Фигура 15-2 Структура на таблото за броене на кръвни клетки (2) A. Изглед отпред; Б. Надлъжен разрез; уголемена квадратна мрежа, големият квадрат в средата е камерата за броене 1. Кръвни клетки Табло за броене; 2. Покривно стъкло; 3. Когато броите в камерата за броене, обикновено пребройте общия брой бактерии в пет квадрата, след това намерете средната стойност на всеки квадрат и след това умножете по 25 или 16, за да получите Общият брой бактерии в голям квадрат след това се преобразува в общия брой бактерии в 1 ml бактериален разтвор. Да предположим, че общият брой на бактериите в петте средни квадрата е A, а факторът на разреждане на бактериалния разтвор е B. Ако това е плоча за броене с 25 средни квадрата, тогава общият брой бактерии в 1 ml от бактериалния разтвор {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (парчета) По същия начин, ако това е плоча за броене с 16 квадрата, общият брой бактерии в 1mL бактериален разтвор {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (части),,
