Сравнение на конфокален микроскоп и обикновен оптичен микроскоп
Микроскопът е основният инструмент за наблюдение на клетките. В зависимост от източника на светлина, той може да бъде разделен на две категории: оптичен микроскоп и електронен микроскоп. Първият използва видима светлина (ултравиолетов микроскоп до ултравиолетова светлина) като източник на светлина, докато вторият използва електронен лъч като източник на светлина. Обикновеният оптичен микроскоп и лазерният конфокален микроскоп принадлежат към един и същ оптичен микроскоп.
I. Общ оптичен микроскоп
Обикновеният биологичен микроскоп се състои от три части, а именно: ① осветителна система, включително източник на светлина и кондензатор; ② система за оптично увеличение, състояща се от обективи и окуляри, е основното тяло на микроскопа, за да се елиминират сферичните аберации и хроматичните аберации, окулярите и обективите са съставени от сложна група лещи; ③ механично устройство, използвано за фиксиране на материала и спазване на удобството.
Обектът на микроскопа е ясен не само определен от увеличението, но и с разделителната способност на микроскопа (резолюция), разделителната способност се отнася до микроскопа (или човешкото око от целта 25 см) може да различи обекта zui малки интервали от способността да разграничаването на размера на разделителната способност се определя от дължината на вълната на светлината и скоростта на отваряне на огледалото и индекса на пречупване на средата, изразен във формулата:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 където: n=индексът на пречупване на средата;=ъгълът на отваряне на огледалото (образец върху входа на лещата на обектива на ъгъла на опън), NA=скорост на отваряне на огледалото (цифрова апертура). Ъгълът на отваряне на огледалото винаги трябва да бъде по-малък от 180°, така че zui стойността на sina/2 е задължително по-малка от 1.
Коефициентът на пречупване на стъклото, използвано при производството на оптични лещи, е 1,65 ~ 1,78, индексът на пречупване на използваната среда, колкото по-близо до стъклото, толкова по-добре. За сухи лещи на обектива, средата за въздух, скоростта на отваряне на огледалото обикновено е 0.05 ~ 0,95; маслена леща с кедрово масло като среда, скоростта на огледалото в устата може да бъде близо до 1,5.
Обикновена дължина на светлинната вълна от 400~700nm, така че стойността на разделителната мощност на микроскопа няма да бъде по-малка от 0,2μm, разделителната способност на човешкото око е 0,2mm, така че общият дизайн на микроскопа zui увеличение обикновено е 1000X.
Второ, лазерен конфокален сканиращ микроскоп
Лазерен конфокален сканиращ микроскоп (лазерен конфокален сканиращ микроскоп), с лазер като източник на сканираща светлина, бързо сканиращо изображение точка по точка, линия по линия, повърхност по повърхност, сканиращ лазер и флуоресцентна колекция от общ обектив, сканираща лазерна фокусираща точка на обектива , но и моментално изобразяване на точката на обекта. Поради по-късата дължина на вълната на лазерния лъч, лъчът е много фин, така че конфокалният лазерен сканиращ микроскоп има висока разделителна способност, около 3 пъти по-голяма от тази на обикновен оптичен микроскоп. Системата се фокусира веднъж и сканирането е ограничено до една равнина на пробата. Когато дълбочината на фокусиране не е една и съща, могат да се получат изображения с различни нива на дълбочина на пробата и тази информация за изображението се съхранява в компютъра, чрез компютърен анализ и симулация може да покаже триизмерната структура на клетъчната проба .
