Сравнение между конфокална микроскопия и конвенционална оптична микроскопия
Микроскопът е основният инструмент за наблюдение на клетките. Според различните източници на светлина може да се раздели на две категории: оптични микроскопи и електронни микроскопи. Първият използва видима светлина (ултравиолетовият микроскоп използва ултравиолетова светлина) като източник на светлина, докато вторият използва електронен лъч като източник на светлина. Както обикновените оптични микроскопи, така и лазерните конфокални микроскопи принадлежат към оптичните микроскопи.
Обикновен оптичен микроскоп
Един общ биологичен микроскоп се състои от три части, а именно: ① осветителна система, включително източник на светлина и кондензатор; ② Системата за оптично усилване, състояща се от обектив и окуляр, е основното тяло на микроскопа. За да се елиминират сферичните и хроматичните аберации, както окулярът, така и обективът са съставени от сложни групи лещи. Механично устройство, използвано за фиксиране на материали и улесняване на наблюдението.
Яснотата на изображението на микроскопа зависи не само от неговото увеличение, но и от неговата разделителна способност. Разделителната способност се отнася до способността на микроскоп (или човешко око на разстояние 25 см от целта) да разграничава обекти на малки интервали. Големината на разделителната способност зависи от дължината на вълната на светлината, индекса на блендата и индекса на пречупване на средата. Изразява се като: R=0.61 λ/NANA=nsin /2, където n=коефициентът на пречупване на средата; =ъгъл на отвора (ъгълът, под който образецът отваря отвора на лещата на обектива), NA=цифрова апертура. Винаги ли ъгълът на огледалото е по-малък от 180?, така че максималната стойност на zui за sina/2 трябва да бъде по-малка от 1.
Коефициентът на пречупване на стъклото, използвано при производството на оптични лещи, е 1.65-1.78 и колкото по-близък е индексът на пречупване на използваната среда до този на стъклото, толкова по-добре. За сухи лещи на обектива средата е въздух, а съотношението на диафрагмата обикновено е 0.05-0.95; Масленият обектив използва кедрово масло като среда, а съотношението на блендата може да бъде близо до 1,5.
Дължината на вълната на обикновената светлина е {{0}}nm, така че стойността на разделителната способност на микроскопа няма да бъде по-малка от 0.2 μm, а разделителната способност на човешкото око е 0,2 mm. Следователно максималното увеличение за дизайна на микроскопа обикновено е 1000X.
