Биомикроскопия по отношение на обема на тъканните блокове
Биологична микроскопия Досега студената фиксация, замразеният ултратънък срез и изсушаването чрез замразяване са рутинни методи за рентгенови микросрезове на тъкани и клетки. Подробностите за този метод са обяснени, както следва:
За биологични микроскопи с кондензатор, кондензаторът може да се движи нагоре и надолу, за да направи яркостта умерена, а апертурата на променливата светлина също може да се промени, за да се постигне умерена яркост 9b. Ако светлината е слънчева, кондензаторът може да бъде повдигнат по подходящ начин и апертурата на променливия източник на светлина може да бъде подходящо увеличена. Ако светлината е твърде силна, събирателната леща може да се спусне по подходящ начин и апертурата на пресичащата се светлина може да бъде намалена по подходящ начин. Ако все още се чувствате ослепителни в този случай, можете да изберете подходящ филтър и да го поставите на скобата под кондензатора. Този дъб ще може да получи яркостта, която ви удовлетворява. Разбира се, регулирането на горната и долната позиция на кондензатора, регулирането на размера на апертурата на променливото оптично отчитане и изборът на подходящ филтър изисква определен период на практика, за да придобиете опит.
Много важен въпрос в биологичната микроскопия е, че в процеса на вземане на проби и отделяне на клетки, след сушене чрез замразяване и вграждане на смола (FD), след замразяване на ултратънки агрегати и след сушене чрез замразяване, съдържанието на 65 елемента във всяка част трябва да се обработва внимателно. Клетките, които ще бъдат анализирани, не могат да бъдат повредени. Тъй като рентгеновият микроанализ не само включва много стъпки, но и струва много. Ако анализираните клетки са повредени клетки или мъртви клетки след дълго време и многоетапна обработка, е много жалко да се правят грешни заключения. Например кардиомиоцитите, разделени чрез третиране с колагеназа, имат две форми, едната е дълга пръчковидна, а другата е кръгла. Последните са умиращи клетки, които се увреждат по време на клетъчната изолация.
Биомикроскопия Количеството и разпределението на електролитите в тези два вида клетки са доста различни. Na е много висок и K е много нисък в кръговите кардиомиоцити, а концентрацията на ca в нематодите е много висока. След проверка с други методи за анализ е доказано, че високият Na и ниският K на кръглите клетки и високият Ca в митохондриите се дължат на увреждане на клетъчната мембрана по време на процеса на разделяне на клетките. Методът на леденостудена фиксация на клетки и тъкани обикновено е първо да се приеме охлаждане и фиксация и след това да се съхраняват в течен азот. Охлаждащата фиксация е много важна за ефекта от консервирането. Живите клетки или свежите тъкани са богати на вода. При охлаждане частите от клетките или тъканите, които са в пряк контакт с натрошения хладилен агент (особено при охлаждане с течен азот), често първо се замразяват и фиксират, като по този начин се образува „обвивка“, която пречи на централните части на клетките смачкани и студено фиксирани. Ето защо, когато се прави анализ на микрозони с X-линия, често се открива, че има ледени кристали в центъра на по-големи клетки. За да се предотврати това да се случи, вещество с точка на топене, по-висока от тази на течния азот, но по-ниска от тази на 806c, се използва като счупен хладилен агент. Има много такива вещества, но най-евтиният е концентрираният пропан (точка на кипене - 42.120c, точка на топене - 187.10c, молекулно тегло 44.1), а скоростта на охлаждане е най-бърза. Но недостатъкът му е, че е запалим.
Биологичният микроскоп може да постави мускулното влакно върху специална стойка, така че когато свиването на мускулното влакно достигне определена фаза и трябва да бъде фиксирано, незабавно стартирайте дюзата, за да пръскате течен пропан към мускулното влакно, за да го охладите и фиксирате. След това мускулните влакна заедно с рамката бяха извадени и поставени в течен азот. Ако фиксирате кръвни клетки или изолирани клетки, първо концентрирайте клетките чрез центрофугиране при ниска скорост, прехвърлете клетките в сребърен флакон с добра топлопроводимост, поставете флакона в течен пропан и замразете за фиксиране. При фиксирането на панкреаса на плъх в лабораторията на Хол, двата стоманени блока бяха предварително охладени с течен хелий (или течен азот), а двата медни блока бяха захванати с форцепс и поставени отпред и отзад на панкреаса, за да се охладят и фиксират панкреаса. Тъкани или клетки могат да се съхраняват в течен азот за дългосрочно съхранение след охлаждане и фиксиране.
Биологична микроскопия В допълнение към най-уважавания метод на замразени ултратънки срезове, ето още една техника на отлагане, използвана от учените. Добавя се вещество, за да се образува утайка с компонента, който трябва да се анализира, за да се обездвижи преди анализа, след което утайката се анализира. Например, хората често използват оксалат и пироантимонат, за да отлагат Ca в мускулните клетки. Първият не е достатъчно чувствителен към ниската концентрация на Ca в цитоплазмата; пироантимонатът е по-чувствителен и може да образува електронно-плътни отлагания със свободен Ca в мозъка, но пироантимонатът не е съвместим с натрий, манган, барий, желязо. Отлаганията също се образуват и са по-малко специфични. Процесът на приготвяне на пробата е подобен на подготовката на обикновени ултратънки срезове с трансмисионен електронен микроскоп, разликата е, че 3 процента калиев пироантимонат (фосфатен буферен физиологичен разтвор, рН 7,6) се фиксира за 6 часа преди фиксирането, а върху оцветените мускулни ултратънки срезове, Виждат се черни отлагания в средните линии на ленти А и 2 на всеки саркомер и неоцветени срезове се използват за рентгенов микроанализ. Диаминобензидин тетрахидрохлорид (DAB) се използва за утаяване на хем-съдържащи вещества и т.н. Комбинацията от реакция на хистохимично утаяване и рентгенов микродиференциращ мост може да се обмисли в лаборатории, които нямат условия на замразени ултратънки срезове. Полуколичественото може да се направи според височината на пика на елементите, които ще се анализират
