Предимства за напредък на многофотонните микроскопи с лазерно сканиране
Лазерният сканиращ многофотонен микроскоп е значително подобрение на оптичната микроскопия, проявяващо се главно в способността да се наблюдават дълбоки структури на живи клетки, фиксирани клетки и тъкани и да се получат ясни и ясни много{0}}слойни Z-равнинни структури, а именно оптични срезове, които могат да се използват за конструиране на три-измерни твърди структури на образци. Конфокалният микроскоп използва източник на лазерна светлина, който се разширява, за да запълни цялата фокална равнина на лещата на обектива, и след това се събира в много малки точки на фокалната равнина на образеца през системата от лещи на лещата на обектива. Според числовата апертура на лещата на обектива диаметърът на най-ярката точка на осветяване е около 0,25-0,8 μm, а дълбочината е около 0,5-1,5 μm. Размерът на конфокалната точка се определя от дизайна на микроскопа, дължината на вълната на лазера, характеристиките на обектива, настройките на състоянието на сканиращия модул и свойствата на образеца. Диапазонът на осветяване и дълбочината на полето на микроскопа са големи, докато осветяването на конфокалния микроскоп е фокусирано върху безопасна фокусна точка във фокалната равнина. Най-основното предимство на конфокалната микроскопия е, че тя може да извършва фини оптични срезове върху дебели флуоресцентни образци (до 50 μm или повече), с дебелина от приблизително 0,5 до 1,5 μm. Серията от изображения на оптични срезове може да се получи чрез преместване на образеца нагоре и надолу с помощта на стъпковия двигател на оста Z- на микроскопа. Събирането на информация за изображението се контролира в рамките на безопасна равнина и няма да се намесва от сигнали, излъчвани от други места върху образеца. След премахване на влиянието на фоновата флуоресценция и увеличаване на съотношението сигнал/шум, контрастът и разделителната способност на конфокалните изображения са значително подобрени в сравнение с традиционните флуоресцентни изображения с полево осветление. В много екземпляри сложни структурни компоненти се преплитат, за да образуват сложни системи, но след като могат да бъдат събрани достатъчно оптични секции, можем да използваме софтуер, за да ги реконструираме в три измерения. Този експериментален метод е широко използван в биологичните изследвания за изясняване на сложните структурни и функционални връзки между клетките или тъканите.
